INVESTIGADORES
MAZZAFERRO Laura
congresos y reuniones científicas
Título:
Síntesis de 4-metilumbeliferil-α-ramnosil-β-glucósido para la detección de actividad diglicosidasa
Autor/es:
LAURA MAZZAFERRO; LUCRECIA PIÑUEL; JAVIER D. BRECCIA
Lugar:
Montevideo, Uruguay
Reunión:
Otro; IV Encuentro Regional de Biocatálisis y Biotransformaciones; 2010
Resumen:
Los metilumbeliferil-glicósidos son compuestos ampliamente utilizados para la determinación de actividades glicosidasas, dada la alta emisión de fluorescencia que posee 4-metilumbeliferona (4-MU) con respecto a los primeros. En un trabajo anterior se demostró que la glicosil hidrolasa α-ramnosil-β-glucosidasa de Acremonium sp. SES201 es capaz de transglicosilar en medio acuoso [1]. La especificidad de aceptor fue analizada utilizando hesperidina como donor y diferentes alcoholes aceptores. La enzima fue capaz de transferir unidades de rutinosa (α-ramnosil-β-glucosa) desde el flavonoide a los alcoholes alquílicos primarios y secundarios, pero no a los alcoholes terciarios. Cuando se utilizó el fluoróforo 4-MU como aceptor (30ºC, pH 5) se encontró un producto fluorescente que contenía azúcar en su estructura. En cuanto a la cinética de reacción, este producto alcanzó un máximo de producción a los 30 minutos, disminuyendo un 86% luego de 2 h, mientras que la reacción de hidrólisis mantuvo velocidades iniciales a lo largo del proceso. A fin de escalar la reacción para ensayos de estructura, se diseñó un reactor enzimático inmovilizando la enzima en perlas de quitosano-polietilenimina (1.1 U/g perlas). El producto de interés se purificó y analizó por MALDI-TOF/TOF. Se encontró una señal a una relación carga masa de 507.47 m/z que se correlacionó con el ion esperado para 4-MU rutinósido, [M+Na]+: 507.44 m/z (Fig. 1). Dicho compuesto fue útil para la detección de actividades diglicosidasas en zimogramas de poliacrilamida.
rds']