INVESTIGADORES
LOZADA mariana
congresos y reuniones científicas
Título:
ANÁLISIS POR DGGE DE LA DIVERSIDAD DE BACTERIAS ENRIQUECIDAS EN HAPs A PARTIR DE SEDIMENTOS MARINOS DE LA COSTA PATAGÓNICA
Autor/es:
LARA, J; RIVA MERCADAL, JUAN PABLO; LOZADA, MARIANA; DIONISI, HEBE; FERRERO, MARCELA
Lugar:
Córdoba
Reunión:
Congreso; XI Congreso Argentino de Microbiología (CAM 2007); 2007
Resumen:
En la costa patagónica las actividades antropogénicas son las principales causas de introducción de Hidrocarburos Aromáticos Policíclicos (HAPs) en este ambiente. La capacidad biodegradativa de comunidades microbianas y aislamientos presentes en sedimentos contaminados ha sido descripta para un potencial uso en biorremediación. En este trabajo se propone realizar una descripción de la diversidad bacteriana cultivable presente en diversos sitios de la costa patagónica. Para abordar el estudio de la biodiversidad microbiana en poblaciones obtenidas por enriquecimiento en HPAs, se utilizará una combinación de PCR y electroforesis o separación de fragmentos de DNA amplificados por PCR en geles de poliacrilamida (PA) con gradiente lineal desnaturalizante (DGGE). Los enriquecimientos fueron realizados en medio líquido a 20 ºC en medio mínimo (MMYE) adicionado con naftaleno o fenantreno como única fuente de carbono y energía y utilizando como inóculo el sedimento intermareal de distintos puntos de la costa patagónica: muelles de Puerto Madryn, Comodoro Rivadavia, Rawson y Ushuaia. A distintos tiempos (15, 30 y 60 días), se tomaron alícuotas del mismo frasco que fueron utilizadas para la extracción de DNA total de las poblaciones enriquecidas en HAPs y para el crecimiento en medio sólido de las poblaciones microbianas proveniente de los enriquecimientos.
El análisis de las comunidades bacterianas mediante DGGE, nos permitió establecer no solo la identidad de las bacterias que habían sido obtenidas por enriquecimiento en naftaleno o fenantreno en los distintos sitios muestreados, sino a su vez, comparar las que son capaces de crecer en las dos condiciones de cultivo propuestas: líquido y sólido. La reamplificación y secuenciación de las bandas obtenidas por DGGE, nos permitió establecer la presencia de una gran variedad de bacterias marinas, entre las cuales se destaca <i>Cycloclasticus</i>, presente en todos los sedimentos analizados y enriquecida en medio líquido tanto con naftaleno como con fenantreno. Sin embargo, esta bacteria estuvo pobremente representada en medio sólido. A diferencia de <i>Cycloclasticus</i>, bacterias representantes de <i>Cobetia</i>, <i>Halomonas</i> y <i>Marinomomas</i> fueron solamente encontradas en poblaciones obtenidas en medio sólido.
Paralelamente, la presencia de genes que codifican para la enzima naftaleno 1,2-dioxigenasa, fue investigada también en los ADNs totales extraídos de las poblaciones bacterianas enriquecidas, utilizando una variedad de cebadores diseñados para bacterias marinas degradadoras de HAPs. La presencia de genes <i>phnA1</i> descriptos en bacterias del género <i>Cycloclasticus</i> fue observada en la mayoría de los enriquecimientos con un grado de conservación muy elevado.
CONCLUSIONES
La presencia de genes de tipo <i>phnA1</i> en enriquecimientos realizados a partir de sedimentos y de secuencias del gen del ARNr 16S del género <i>Cycloclasticus</i> indican la presencia de bacterias degradadoras de HAPs pertenecientes a este género en sedimentos costeros de Patagonia. Los genes <i>phnA1</i> también fueron detectados mediante PCR en poblaciones bacterianas compuestas por otros géneros como <i>Cobetia</i> y <i>Halomonas</i> demostrando potencial de degradación intrínseca en bacterias cuyo metabolismo de HPAs es poco conocido.