INVESTIGADORES
MUGLIA Cecilia Isabel
congresos y reuniones científicas
Título:
Una diversidad de genes aparentemente no relacionados entre si son requeridos para la tolerancia a estreses ambientales en R. tropici
Autor/es:
RICCILLO, P. M.; MUGLIA, C. I.; AGUILAR, O. M.
Lugar:
Córdoba, Argentina
Reunión:
Congreso; XXXIII Congreso de la Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular; 1997
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Bioquímica y Biología Molecular
Resumen:
Se ha descrito la capacidad intrínseca de las cepas de R. tropici Tipo IIB de asociarse eficientemente con Phaseoulus sp. y tras leguminosas tropicales como Leucaena y Macroptilium, en condiciones de estreses ambientales tales como alta temperatura, acidez, altos niveles de aluminio. Con el fin de aumentar nuestro conocimiento sobre los determinantes genéticos y bioquímicos implicados en la tolerancia a los distintos estreses ambientales en rizobio, hemos caracterizado mutantes de R. tropici sensibles a la alta temperatura, y acidez. Luego de la mutación generalizada de R. tropici con el transposón Tn5-lux, selección y caracterización de los transconjugantes, se realizó un análisis físico de los genomas mediante la técnica de Southern usando una sonda para el transposón marcada con 32P. Un alto porcentaje presentó más de la única banda esperado por genoma. Para el análisis de las secuencias, se seleccionaron los mutantes que mostraron una única inserción por genoma, así la identidad y a función del gen en cuestión estará asociado al fenotipo sensible. A partir del ADN total proveniente de algunos miembros de esa colección se ha logrado clonar en E. coli las regiones de R. tropici que flanquean el transposón, mediante rescate del plásmido. Estas regiones fueron secuenciadas por el método de Sanger, traducidas y comparadas con un banco de datos de proteínas, identificándose tres mutantes con homología con IMP (inosin monofosfato deshidrogenada), PHGK (fosfoglicerato kinasa) y GSH (glutatión sintetasa). En el caso de GSH, está descrito que estaría involucrada en la función antioxidante. Se realizó la confirmación de estas mutaciones, regenerándolas mediante un doble crossover con el fragmento de EcoRI del mutante y el genoma salvaje. Se ensayó la expresión de la actividad lux de los distintos mutantes en medio mínimo pH 7,5 y 5,0, respectivamente, encontrándose una expresión diferencial en condiciones de acidez. Estas secuencias no tienen homología con el actual banco de datos. Se examinó el fenotipo simbiótico de los mutantes en ensayos de coinoculación de poroto y leucaena. Se encontraron dos mutantes defectivos en la simbiosis (Fix,Nod-). Con el mutante en el gen IMPd se realizaron experimentos en los cuales se complementó el medio con guanina, observándose la recuperación del crecimiento en condiciones de altas temperaturas. Contrariamente no se observó la recuperación de la nodulación a temperatura normal (25 °C), posiblemente por la dificultad de la incorporación de la guanina en los nódulos Fix-.