INVESTIGADORES
MUGLIA Cecilia Isabel
congresos y reuniones científicas
Título:
Clonado del gen gshB (codificante de la glutatión sintetasa) de Rhizobium tropici CIAT899
Autor/es:
MUGLIA, C. I.; AGUILAR, O. M.
Lugar:
Viña del Mar, Chile
Reunión:
Congreso; Reunión Iberoamericana de Bioquímica, Biología Molecular y Biología Celular; 2000
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación en Bioquímica y Biología Molecular.
Resumen:
Hemos demostrado en estudios anteriores que el glutatión en R. tropici es importante en la tolerancia a la acidez y estrés osmótico y al agente electrofílico metilglioxal. La mutación del gen de la glutatión sintetasa (gshB) determinan un fenotipo de sensibilidad a esos agentes ambientales y químicos, afectando probablemente los canales de eflujo de potasio. En el presente trabajo se clonó a la región salvaje del gen gshB de Rhizobium tropici CIAT899 a partir de una minibiblioteca de fragmentos EcoRI. Mediante análisis de restricción y comparación con los datos de secuencia conocida se confirmó que el plásmido clonado contenía la secuencia salvaje de este gen. El fragmento se subclonó en un plásmido replicativo en Rhizobium generándose el plásmido pCMA. Este plásmido se utilizó para transformar las cepas CIAT899 y el mutante gshB cepa CIAT899-13T2. El mutante conteniendo el plásmido pCMA recuperó su capacidad salvaje para tolerar la acidez y al compuesto metilglioxal. Se determinaron los niveles de glutatión encontrándose que la cepa mutante CIAT899-13T2 presenta niveles de glutatión entre 20 y 100 veces inferiores a los de la cepa salvaje. La cepa CIAT899-13T2 con el plásmido pCMA presentó niveles similares a los de la cepa salvaje. Asimismo, los niveles de glutatión en condiciones de acidez se incrementan unas diez veces con respecto a los niveles a pH neutro, indicando que habría una regulación en respuesta a la acidez del medio. Teniendo en cuenta la importancia del glutatión endógeno en la respuesta a estreses ambientales, se ensayó el efecto de la introducción de plásmidos expresando el gen gshB de R. tropici sobre la tolerancia de cepas de S. meliloti y R. etli, intrínsecamente sensibles después de la acidez.
