INVESTIGADORES
PELLEGRINI MALPIEDI luciana
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudio de la estabilidad de enzimas en presencia de surfactantes biodegradables para la formulación de detergentes enzimáticos
Autor/es:
GONZALO BENEDETTI; GEORGINA MARTINI; ESTEBAN A MORILLA; GISELA TUBÍO; LUCIANA PELLEGRINI MALPIEDI
Reunión:
Jornada; XIII Jornadas de Ciencia y Tecnología; 2019
Resumen:
Objetivo: Evaluar la estabilidad de diversas enzimas en presencia de surfactantes sintéticos y/o biológicos, visando un ulterior diseño de detergentes enzimáticos. Metodología: Se producirán surfactantes biológicos (biosurfactantes) a partir de Bacillus subtillis. Dichos ensayos se realizarán empleando medios líquidos compuestos por subproductos de la industria regional, tales como glicerol, harina de soja, entre otros. La presencia de biosurfactantes (BS) será determinada de manera indirecta mediante el índice de emulsificación (IE). Dicha metodología consiste en agitar en vórtex tubos de vidrio graduados, conteniendo iguales volúmenes de kerosene y una muestra de medio de cultivo libre de células. Dicha mezcla se deja en reposo durante 10 minutos para luego determinar la altura de la emulsión formada. El IE será calculado como el cociente entre la altura de la emulsión formada y la altura total de la mezcla. La extracción de BS será llevada a cabo mediante precipitación ácida. Para ello, al final del cultivo se procederá a centrifugar el medio de cultivo a baja velocidad para remover las células. Al sobrenadante obtenido se le adicionará HCl 6,0 M hasta lograr un valor de pH de 2,00. Luego, esta solución será incubada durante toda una noche a 4°C. Posteriormente, la misma será centrifugada nuevamente y en este caso el BS será recuperado en el precipitado. Para los ensayos de estabilidad enzimática se emplearán diferentes proteínas puras o formando parte de mezclas enzimáticas. Las mismas serán incubadas a diferentes temperaturas y valores de pH en presencia de los detergentes sintéticos Genapol X-080 y Tergitol 15-S con/sin adicionamiento de los biosurfactantes producidos. La estabilidad de las enzimas estudiadas será monitoreada mediante actividad enzimática, determinaciones espectroscópicas y electroforesis en geles de poliacrilamida. Avances preliminares: En el grupo de trabajo ya se han realizados algunos ensayos de producción de biosurfactantes empleando diferentes medios de cultivo. A partir de los resultados obtenidos, pudo apreciarse que en todas las condiciones evaluadas la producción de BS comenzó entre el final de la fase de crecimiento exponencial y comienzo de la fase estacionaria. La selección del medio de cultivo a emplear se realizó comparando la capacidad emulsificante del BS extraído al final del cultivo. A partir de los resultados reportados pudo apreciarse que todas las muestras de BS formaron emulsiones con valores de IE superiores al 60%, los cuales son muy satisfactorios si se los compara con la bibliografía publicada. No obstante, para posteriores ensayos de producción de BS se seleccionó al medio de cultivo formado por glicerol, NaNO3, extracto de levadura, NaCl y Na2HPO4, dado que presentó las siguientes propiedades ventajosas: - permitió la producción de un extracto de BS con capacidad emulsificante superior al de la mayoría de los medios evaluados; - varios de sus componentes son sales, incrementando la reproducibilidad de su composición; - la principal fuente de carbono fue glicerol refinado, subproducto de la industria del biodiesel, - la apariencia del medio fue translucida, no interfiriendo en los diferentes métodos analíticos. Discusión: A partir de los resultados preliminares pudo seleccionarse un medio adecuado para producir BS. Dicha información servirá como punto de partida para la optimización de la producción de BS y posteriores ensayos de actividad enzimática en presencia de los tensoactivas previamente mencionados.