SISTEMAS MICELARES DE DOS FASES ACUOSAS FORMADOS POR TRITÓN X-114 Y MEDIO DE CULTIVO DE PICHIA PASTORIS COMO METODOLOGIA INTEGRATIVA PARA EXTRAER ANTICUERPOS RECOMBINANTES

LUCIANA PELLEGRINI MALPIEDI; CESAR DÍAZ ARIAS; BIBIANA B. NERLI; ADALBERTO PESSOA JR

Natal

Congreso; 27 CONGRESSO BRASILEIRO DE MICROBIOLOGIA; 2013

INTRODUCCION La extracción líquido-líquido en sistemas micelares de dos fases acuosas (SMDFAs) es una metodología que ya ha demostrado resultados satisfactorios en cuanto a la integración de procesos como clarificado, concentrado y enriquecimiento de diversas biomoléculas. En este marco, el objetivo de este trabajo fue desarrollar estrategias separativas sencillas y económicas para la extracción del fragmento de anticuerpo scFv anti LDL ox a partir de Pichia pastoris, empleando SMDFAs formados por el detergente no iónico Tritón-X114 y medio de cultivo de levadura. MATERTIALES Y METODOS En primer lugar, fueron determinadas las correspondientes curvas de coexistencia para aquellos sistemas micelares formados por el detergente no iónico Tritón X-114 y diferentes proporciones de medio de cultivo de Pichia pastoris (30, 60 y 90 %mt). Se analizó además el efecto de diferentes variables como la presencia de sales (NaCl, MgSO4 y KI) y los ligandos Cibacron Blue F3GA (CB) y FabsorbentTM F1P (HF) sobre la temperature de separación de fases (Tsep). RESULTADOS La temperatura de separación de fases por parte de los sistemas estudiados resultó ser inferior a 40°C en la mayoría de los casos ensayados. A medida que fue incrementada la proporción de cultivo de levadura en el medio, Tsep disminuyó abruptamente. Resultados similares fueron observados para el agregado de NaCl, MgSO4, CB y HF. Por otro lado, aquellos sistemas que contenían KI, mostraron un incremento en sus respectivas Tsep. CONCLUSIÓN Debido a las bajas temperaturas de separación de fases y a la alta proporción de medio de cultivo que fue posible incorporar a los sistemas, los SMDAs en estudio fueron considerados apropiados para ser aplicados a la extracción de anticuerpo recombinantes a partir de medio de Pichia pastoris.