APLICABILIDAD DE LOS SISTEMAS BIFÁSICOS ACUOSOS POLIETILENGLICOL/TARTRATO DE SODIO EN LA PURIFICACIÓN DE TRIPSINOGENO Y QUIMOTRIPSINÓGENO A PARTIR DE SU FUENTE NATURAL

LUCIANA PELLEGRINI MALPIEDI; GUILLERMO PICO; BIBIANA NERLI

Salta

Congreso; XVI Congreso Argentino de Fisicoquímica y Química Inorgánica; 2009

Asociación Argentina de Investigación Fisicoquímica

La extracción líquido-líquido con sistemas bifásicos acuosos (SBAs) constituye una operación unitaria de creciente empleo en los últimos años en diferentes protocolos de purificación. Previamente se ha trabajado con SBAs PEG/NaCit para la purificación de dos proteasas pancreáticas con múltiples aplicaciones a nivel industrial y de laboratorio: tripsina y quimotripsina. Las mismas son sintetizadas y almacenadas en el páncreas de mamíferos en forma de precursores inactivos: tripsinógeno (TRPz) y quimotripsinógeno (QTRPz). El objetivo de este trabajo fue estudiar la aplicabilidad de diferentes SBAs PEG/NaTart a la purificación de dichos zimógenos y posterior activación para obtener a las proteínas de interés. En primer lugar se estudió el perfil de reparto de TRPz y QTRPz por separado empleando SBAs formados con PEGs de diferentes pesos moleculares, diferentes composiciones totales (LLU) y a pH regulado en 5,00. Además se estudió el efecto de algunas variables como temperatura, agregado de sales y diferentes relaciones de volúmenes de fase (Vt/Vb). El coeficiente de reparto (Kr) de proteínas se obtuvo a partir del cociente de las actividades de las mismas en cada fase. La selección de los SBAs a ser utilizados para la purificación de TRPz y QTRPz a partir del páncreas bovino fue realizada a partir delcálculo de los valores teóricos de rendimiento (R) y pureza (P) que se obtendrían a partir de mezclas formadas con iguales cantidades de ambos zimógenos, asumiendo que los valores de Kr no se verían modificados en mutua presencia. Los resultados obtenidos mostraron que en la mayoría de los SBAs, TRPz presentó valores de Kr  menores a los de QTRPz, indicando que el equilibrio de reparto se halla más desplazado hacia la fase rica en sal. Por otro lado, se observó que los valores de Kr disminuyen al incrementarse el tamaño del polímero y que los mismos resultan ser sensibles a la concentración de PEG y NaTart. Los SBAs seleccionados fueron aquellos formados por PEGs de peso molecular 600, 2000, 4000 y 6000, con composiciones totales correspondientes a las LLU 3 y 4, y una relación de volúmenes de fase unitaria. El reparto del homogenado fue realizado sin ningún tratamiento previo y fue agregado en una proporción correspondiente al 5 % de la masa total del SBA. Los valores de Kr para cada una de las proteínas mostraron ligeras diferencias con respecto a aquellos que habían sido determinados cuando las mismas se encontraban por separado. Sin embargo, para la mayoría de los casos se mantuvo la tendencia de TRPz a repartirse más hacia la fase rica en sal con respecto a QTRPz; excepto para el SBA formado por PEG 4000 y LLU 4. Los SBAs que arrojaron mejores resultados fueron los correspondientes a PEGs de pesos moleculares 600 y 4000. Los mismos presentaron valores de R comprendidos entre 70-90 % y factores de purificación cercanos a 3, demostrando que este metodología podría ser implementada como un primer paso de un protocolo de purificación.