ESTUDIO DEL PERFIL DE REPARTO DE TRIPSINÓGENO Y QUIMOTRIPSINÓGENO EN SISTEMAS BIFÁSICOS ACUOSOS FORMADOS POR POLIETILÉNGLICOL Y TARTRATO DE SODIO

LUCIANA PELLEGRINI MALPIEDI; GUILLERMO PICO; BIBIANA NERLI

Rosario

Congreso; XXVIII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2008

Sociedad de Biología de Rosario

La extracción líquido-líquido con sistemas bifásicos acuosos (SBAs) constituye una operación unitaria de creciente empleo en los últimos años en diferentes protocolos de purificación. Debido a que los SBAs más empleados son los constituídos por polietilenglicol (PEG) y fosfato de sodio, que impactan negativamente en el medio-ambiente, resulta de interés desarrollar nuevos SBAs más amigables que puedan reemplazarlos. En trabajos previos, hemos caracterizado y estudiado las propiedades de reparto de SBAs formados por polietilenglicol (PEG) y una sal de anión biodegradable, el citrato de sodio (NaCit). Más recientemente, hemos caracterizado los equilibrios líquido-líquido de un nuevo SBA formado por PEG y tartrato de sodio (PEG/NaTart). El objetivo de este trabajo fue estudiar la aplicabilidad de diferentes SBAs PEG/NaTart a la purificación de dos zimógenos pancreáticos de difundida aplicación industrial: tripsinógeno (TRPz) y quimotripsinógeno bovinos (QTRPz), buscando seleccionar a aquellos sistemas que permitan una óptima separación entre ambos. Se emplearon SBAs formados con PEGs de diferentes pesos moleculares promedio: 600, 1000, 2000, 4000, 6000 y 8000; con distintas composiciones totales iniciales de polímero y sal, y variando la relación de volúmenes fase. En todos los casos se trabajó a pH regulado en 5,00. El coeficiente de reparto (Kr) de cada proteína se obtuvo a partir del cociente de las concentraciones proteicas en cada fase, determinadas por medidas de absorbancia a 280 nm. La selección de los SBAs con mejor capacidad separativa se realizó a través del cálculo de los valores teóricos de rendimiento (R) y pureza (P) que se obtendrían a partir de mezclas formadas con iguales cantidades de ambos zimógenos, asumiendo que los valores de Kr no se verán modificados en mutua presencia. En la mayoría de los SBAs, TRPz presentó valores de Kr menores a los de QTRPz, indicando que el equilibrio de reparto se halla más desplazado hacia la fase rica en sal. Por otro lado, se observó que los valores de Kr disminuyen al incrementarse el tamaño del polímero y que los mismos resultan ser sensibles a la concentración de PEG y NaTart, dada por la longitud de la línea de unión (LLU) del diagrama binodial. La presencia de NaCl, si bien desplazó el equilibrio de reparto hacia la fase superior, no aumentó significativamente la selectividad de ningún SBA. Resultados similares fueron observados en relación al cociente de volúmenes de fase. Los resultados obtenidos mostraron que los SBAs formados por PEGs de peso molecular 2000 y 4000, con composiciones totales intermedias (LLU2 y LLU3) y una relación unitaria de volúmenes de fase, permitirían recuperar entre el 70-90 % de las proteínas con una pureza próxima al 70 %. Estos valores pueden considerarse promisorios para la ulterior aplicación de los SBAs PEG/NaTart a la purificación de TRPz y QTRPz a partir de páncreas bovino, fuente natural de los zimógenos.