EMPLEO DE SISTEMAS BIFÁSICOS ACUOSOS PREFORMADOS Y PRECIPITACIÓN CON POLÍMEROS CARGADOS EN LA PURIFICACIÓN DE TRIPSINA A PARTIR DE PÁNCREAS BOVINO

LUCIANA PELLEGRINI MALPIEDI; DIANA ROMANINI; BIBIANA NERLI; GUILLERMO A. PICO

Tandil

Congreso; XV Congreso Argentino de Fisicoquímica y Química Inorgánica; 2007

Asociación Argentina de Investigación Fisicoquímica

La tripsina (TRP), una proteasa con múltiples aplicaciones a nivel industrial y de laboratorio, es sintetizada y almacenada en el páncreas de mamíferos como su precursor inactivo, el tripsinógeno (TRPz). El objetivo de este trabajo es emplear los sistemas bifásicos acuosos (SBAs) para purificar TRPz a partir de páncreas bovino que por un paso de activación posterior permitirá obtener TRP. Se obtuvieron los patrones de reparto de TRPz y quimotripsinógeno (ChTRPz) por separado, éste último por ser el principal contaminante natural, en SBAs formados por polietilenglicoles (PEGs) de diferentes pesos moleculares y citrato de sodio (Cit) a distintos pHs. Los valores de coeficiente de reparto (Kr) medidos mostraron que los SBAs formados por PEG de peso molecular 1450 y Cit pH 8,2 tenían la mejor capacidad separativa. Dichos resultados se aplicaron a la purificación a partir de homogenado pancreático y se ensayaron las siguientes variables: concentración de los componentes de fase, cantidad de biomasa sembrada y relación de volúmenes de fase superior e inferior (Vsup/Vinf). El seguimiento del proceso extractivo se realizó determinando el Kr de TRPz,de proteínas totales y calculando el rendimiento (R) y factor de purificación (FP) en la fase inferior, rica en citrato. Se ensayó la conveniencia de un paso inicial de eliminación de ácidos nucleicos con un polímero cargado positivamente, polietilenimina (PEI). Se observó que el tratamiento del homogenado pancreático con PEI al 0,25 % pH 7,00 permitía una precipitación selectiva de los ácidos nucleicos (70 %) sin pérdida significativa del contenido de TRPz. El aumento en la concentración de PEG produjo un aumento en el FP del TRPz en la fase inferior sin disminución significativa en los valores de R debido a un descenso relativo mayor del Kr de proteínas totales. El incremento en la cantidad de biomasa sembrada produjo una sensible disminución en el FP sin significativa pérdida recupero proteico. Por otro lado, la disminución de Vsup/Vinf produjo un marcado aumento en la cantidad de TRPz en la fase inferior y pequeñas variaciones en la pureza. La selección de las condiciones adecuadas permitió obtener TRPz 4 veces más puro en la fase inferior del SBA que en su fuente natural con un rendimiento del 54 %, mostrando que esta metodología podría ser adoptada convenientemente como paso inicial de un protocolo de purificación.