Efecto del volumen celular en la regulación del ATP extracelular en eritrocitos humanos

MARÍA FLORENCIA LEAL DENIS; NATALIA LAURI; MARÍA VICTORIA ESPELT; PABLO JULIO SCHWARBAUM

Congreso; Reunión Anual SAFIS 2014; 2014

En varios tipos celulares expuestos a medios hiposmóticos se observa liberación de ATP al medio extracelular en simultáneo al aumento del volumen celular (Vr). Dado que el swelling (aumento de Vr) puede activar mecanismos de salida de ATP (por ejemplo vía panexina 1) y que el ATP extracelular (ATPe), activando receptores purinérgicos, es capaz de modular Vr, se propone una regulación recíproca entre ambos. Esta interacción entre Vr y ATPe no ha sido estudiada en eritrocitos humanos y es el foco del presente estudio. Eritrocitos humanos fueron incubados en presencia del péptido MST7, tratamiento que genera activación de la salida de ATPe y swelling en ausencia de lisis. Los resultados muestran que la exposición a MST7 induce un aumento de la concentración de ATPe ([ATPe]) de 0,50 a 3,50 pmol/106 cél y un swelling de 10%. La pre-incubación con carbenoxolona y probenecid, bloqueantes de panexina 1, redujo un 50% la [ATPe] y un 50% el swelling, mientras que la pre-incubación con la enzima apirasa (removedor de ATPe) redujo un 55% el swelling. Para explicar cómo el ATPe afecta Vr, se postuló que el ATPe activa receptores P2X que median la entrada neta de sodio a las células, induciendo un aumento de la osmolaridad intracelular. Efectivamente, 1- la pre-incubación con NF110 (inhibidor de receptores P2X) redujo un 35% la [ATPe] y un 82% el swelling; 2- el reemplazo del sodio por cloruro de colina en el medio de ensayo redujo un 92% el swelling; 3- la pre-incubación con amilorida (inhibidor de canales de sodio) redujo un 40% la [ATPe] y un 85% el swelling. Para evaluar el efecto del Vr sobre la salida de ATP, las células fueron expuestas a MST7 en medio hiperosmótico, observándose un bloqueo del swelling y una reducción de 50% en la [ATPe]. Los resultados obtenidos muestran, en eritrocitos humanos expuestos a MST7, una regulación recíproca entre el ATPe y Vr.