Espectro de emisión de fluorescencia de hojas intactas en ausencia de procesos de reabsorción de luz

CORDON, G. B.; LAGORIO, M. G.

La Plata

Encuentro; Primera Reunión de Fotobiólogos Argentinos; 2011

Universidad Nacional de La Plata

El espectro de emisión de fluorescencia de hojas intactas está caracterizado por dos máximos centrados alrededor de 680 y 735 nm (Fred y Ffar-red, respectivamente). Sin embargo, el espectro de emisión experimental se encuentra distorsionado por procesos de reabsorción y reemisión de luz debido a la superposición existente entre los espectros de absorción y emisión en hojas enteras. Actualmente, aún se discute cual es la verdadera distribución espectral de la fluorescencia de las hojas intactas, libre de fenómenos de reabsorción interna. En literatura existen modelos que intentan corregir los procesos de reabsorción de la luz en hojas enteras [1, 2 y 3]. Para poder determinar si un modelo de corrección cuantifica adecuadamente estos procesos es necesario contar con una referencia contra la cual comparar los espectros de emisión de fluorescencia ya corregidos. Si el modelo de corrección es válido, ambos espectros deberían coincidir. Por lo tanto es relevante la búsqueda de sistemas donde los procesos de reabsorción de luz sean despreciables para utilizarlos como referencia. Uno de estos sistemas se utilizó en el trabajo de Ramos y Lagorio en 2004 [3]. En este trabajo se procedió a la extracción de los cloroplastos presentes en las hojas y a la posterior determinación de la fluorescencia que emitían estos cloroplastos depositados sobre placas de cuarzo. Los espectros de emisión de los cloroplastos aislados coincidieron en todo el rango de mediciones con los espectros de emisión de hojas enteras corregidos, demostrando así la validez del modelo de corrección en hojas intactas. Una alternativa a la extracción de cloroplastos es la preparación de una suspensión acuosa muy diluida de hojas. De acuerdo con Weis, es posible preparar un polvo de hoja diluido a fin de evitar artefactos debido a la reabsorción de fluorescencia en hojas [4]. El objetivo principal de este trabajo es evaluar la emisión de fluorescencia de una suspensión acuosa de hojas de Ficus benjamina muy diluida preparada según el trabajo de Weis y de la misma suspensión de hoja depositada sobre placas de cuarzo como posibles sistemas libres de reabsorción. La emisión fluorescente de la suspensión diluida de hoja depositada sobre una placa de cuarzo coincide dentro del error experimental con el espectro de emisión de fluorescencia de hojas corregido por procesos de reabsorción de luz (relación de máximos Fred/Ffar-red = 2.01 y 2.04, respectivamente). Sin embargo, la relación Fred/Ffar-red para la suspensión diluida de hoja presenta un valor de 4.20. Se efectuaron mediciones de anisotropía de fluorescencia a partir de las cuales se pudo concluir que no existen artificios en la distribución espectral de fluorescencia debidos a anisotropía en ninguno de los tres sistemas estudiados: hojas intactas, suspensión de hoja diluida y suspensión de hoja depositada sobre placa de cuarzo. Descartando los efectos de anisotropía como posibles responsables de las diferencias observadas entre la suspensión diluida de hojas y la misma suspensión depositada en placas de cuarzo.   Bibliografía 1- Agati G., Fusi F. and Mazzinghi P. 1993. A simple approach to evaluation of the reabsorption of chlorophyll fluorescence spectra in intact leaves. J. Photochem. Photobiol. B: Biol. 17: 163-171 2- Gitelson A., Buschmann C. and Lichtenthaler H. 1998. Leaf chlorophyll fluorescence corrected for re-absorption by means of absorption and reflectance measurements. J. Plant Physiol. 152: 283-296 3- Ramos M. E. and Lagorio M. G. 2004. True fluorescence spectra of leaves. Photochem. Photobiol. Sci. 3: 1063-1066 4- Weis E. 1985. Chlorophyll fluorescence at 77K in intact leaves: Characterization of a technique to eliminate artifacts related to self-absorption. Photosynth. Res. 6: 73-86