SISTEMAS BIFÁSICOS ACUOSOS POLIETILENGLICOL/CITRATO DE SODIO: UN INNOVADOR SISTEMA PARA LA EXTRACCIÓN DE TRIPSINA A PARTIR DE HOMOGENADO PANCREÁTICO BOVINO

TUBÍO, GISELA; PICÓ, GUILLERMO; NERLI, BIBIANA

Rosario

Congreso; Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario.; 2008

Sociedad de Biología de Rosario

El principio de extracción líquido-líquido empleando sistemas bifásicos acuosos (SBAs) representa una alternativa novedosa para la extracción y purificación de moléculas biológicas. La tripsina (TRP) es una enzima de alto valor comercial de uso muy difundido a nivel industrial, farmacológico y en investigación científica. La fuente de obtención de TRP es su zimógeno, el tripsinógeno, almacenado en el páncreas de mamíferos. La etapa crítica de este proceso es su separación de quimotripsina, otra proteína pancreática de propiedades fisicoquímicas muy similares a las de TRP. El objetivo de este trabajo fue purificar TRP a partir de páncreas bovino empleando SBAs formados por polietilenglicol (PEG) de PM 3350 y citrato de sodio (NaCit), el cual permitió simultáneamente obtener una enzima comercialmente valiosa y recuperar un producto de desecho de la industria frigorífica local, el páncreas bovino. Se determinaron los coeficientes de reparto para TRP (KrTRP) y proteínas totales luego de repartir una solución de homogenado pancreático en SBAs PEG3350/NaCit pH 5,20 con diferentes composiciones de equilibrio. Se analizaron los Kr para el proceso de purificación de TRP y el efecto de diferentes variables tales como: composición del SBA, presencia de NaCl hasta concentración final del 7% P/P, disminución de la relación de los volúmenes de fases (Vsup/Vinf); y cantidad de homogenado pancreático incorporado en el SBA. En todos los casos se determinaron los parámetros de rendimiento y el factor de purificación (FP) para los sistemas ensayados. En ausencia de NaCl los coeficientes de reparto fueron muy próximos entre sí careciendo estos sistemas de selectividad. El agregado de NaCl produjo un desplazamiento de KrTRP y de las proteínas totales hacia la fase superior. La disminución de Vsup/Vinf provocó un drástico aumento en el KrTRP. Para proteínas totales el efecto fue menos acentuado y más progresivo. Un 25 % de la biomasa total del sistema prácticamente no afectó el porcentaje de TRP recuperado. Se concluye que el empleo del SBA PEG3350/NaCit pH 5,20 de composición total 12,33 % P/P PEG y 10,45 % de P/P de NaCit, 7 % NaCl y Vsup/Vinf 0,10 constituye un buen punto de partida en la obtención de TRP a partir de homogenado pancreático bovino ya que permite recuperar el 60% de la enzima activa con un factor de purificación próximo a tres.