INVESTIGADORES
NERLI Bibiana Beatriz
congresos y reuniones científicas
Título:
Extracción y purificación de proteasas de alto valor comercial a partir de residuos de la industria frigorífica local
Autor/es:
BOERIS, VALERIA; PICÓ GUILLERMO; ROMANINI DIANA; FARRUGGIA BEATRIZ; NERLI BIBIANA
Lugar:
Rosario
Reunión:
Congreso; XXVII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2007
Institución organizadora:
Sociedad de Biología de Rosario
Resumen:
El empleo masivo de enzimas, especialmente proteasas, ha llevado a la necesidad de contar con fuentes de obtención y metodologías para aislar y purificar las mismas y que permitan manejar grandes cantidades de enzimas a partir de fuentes naturales donde se las pueda extraer. En los últimos años se ha desarrollado el empleo de polielectrolitos (PE) en diversos procesos biotecnológicos, siendo potencialmente importante su empleo en la bioseparación de macromoléculas lábiles. El objetivo de este trabajo fue desarrollar una metodología de bioseparación de la quimotripsina, una proteasa pancreática, a partir de páncreas bovino, que es un producto no aprovechado de nuestra industria frigorífica local, mediante la precipitación empleando polielectrolitos. Como modelo de PE se eligió polivinil sulfonato (PVS) ¿derivado de la síntesis industrial? no toxico. El seguimiento de la interacción QT se realizó mediante medidas de luz dispersada y de turbidez (absorbancia a 420 nm). Se hallo que el PVS forma un complejo soluble con la QT dentro del intervalo de pH 1 a 3,0. A pH superiores la proteína tiende a agregar espontáneamente. La formación del complejo dependió de la concentración de proteína y de polímero además de otros factores como fuerza iónica, presencia de diferentes aniones y pH. Trabajando a concentraciones superiores de PVS se logró que el complejo formara macroagregados y precipitara, esto se siguió mediante medidas de turbidez. Se halló una relación estequiometrica de 4000 moles de QT/mol de PVS. Esto demuestra la baja concentración de polímero necesaria para precipitar QT. Se aplicaron diversas condiciones de precipitación a un homogenado de páncreas bovino previamente tratado con tripsina para activar el quimotripsinógeno (zimógeno de la QT). Las mejores condiciones resultaron ser a pH 2,5 y concentración de PVS 10nM. Luego de aplicado el método de precipitación, la separación del precipitado obtenido por simple centrifugación y redisolución del mismo a pH 8,2 mostró un rendimiento de  QT de 61% con un factor de purificación de 4,7, lo cual demuestra la efectividad del método.