INVESTIGADORES
NERLI Bibiana Beatriz
congresos y reuniones científicas
Título:
Estudio de la interacción de las fitoproteasas bromelina y papaína con alginato sódico como base del desarrollo de una estrategia bioseparativa.
Autor/es:
ROCHA, M. VICTORIA; DI GIACOMO, MELISA; BELTRAMINO, SOFÍA; ROMANINI, DIANA; NERLI, BIBIANA
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XIX Congreso Argentino de Fisicoquímica y Química Inorgánica.; 2015
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Investigación Fisicoquímica
Resumen:
Los alginatos (ALG) son sales de ácido algínico, polisacárido lineal biodegradable, con múltiples aplicaciones en la industria alimenticia y farmacéutica debido a sus propiedades hidrocoloides. Adicionalmente, se los utiliza en inmovililización, precipitación y reparto de afinidad de proteínas debido a su capacidad de interaccionar reversiblemente con ellas formando complejos solubles/insolubles. El objetivo de este trabajo fue analizar la posible formación de complejos entre ALG y dos fitoproteasas de uso industrial: bromelina (BR) y papaína (PAP), para evaluar el uso del mencionado polímero, como macroligando en una estrategia bioseparativa. Se utilizó alginato sódico (NaALG) de baja viscosidad, BR de tallo de ananá y PAP de látex de papaya, con alto grado de pureza. Estas proteínas son cisteín-proteasas con pesos moleculares ( 30000), pI ( 8-9) e hidrofobicidades superficiales similares. Los espectros de DC en el UV lejano mostraron que, en presencia de NaALG (0,1 %P/P), BR y PAP (20 M) presentan el perfil típico de las proteínas + (bandas a 222 nm y 208 nm) y retienen su estructura secundaria. En el UV cercano, BR no sufrió modificaciones mientras que PAP evidenció una caída en la intensidad de la señal, compatible con una disminución en su grado de compactación. Los espectros de emisión de fluorescencia (exc 280 nm) mostraron un fenómeno de extinción y corrimiento del pico emisivo hacia el rojo tanto para BR como PAP. Estas modificaciones no se incrementaron en el tiempo (hasta 3hs) ni tampoco con la temperatura (hasta 50 °C), y sugieren un aumento en la polaridad del entorno de los residuos aminoacídicos fluorescentes, probablemente causada por la proximidad del NaALG. Estos cambios fueron más notorios para PAP y consistentes con la disminución de la constante de Stern Volmer, observada en experiencias de extinción de fluorescencia con acrilamida. La viscosidad intrínseca del NaALG (607 mL/g) en medios de BR y PAP (0,4 %P/P pH 5.20) descendió hasta 516 y 345 mL/g respectivamente. Esto es explicable por la neutralización de los carboxilos del NaALG con los grupos cargados positivamente, presentes en BR y PAP al pH mencionado. Finalmente, se observó que la presencia de NaALG en la fase superior de un sistema bifásico acuoso desplaza el equilibrio de reparto de BR y PAP hacia dicha fase, siendo esto más marcado para PAP cuyo coeficiente de reparto se triplicó. Los resultados obtenidos son concordantes con la formación de complejos entre el NaALG y BR/PAP aunque está aseveración debería ser corroborada por una técnica directa como la calorimetría de titulación isotérmica. A pesar de la similitud de propiedades de BR y PAP, se observó un comportamiento diferencial en cuanto a los cambios estructurales/funcionales inducidos por el NaALG en ambas, evidenciando la selectividad de la interacción proteína-polisacárido. En este caso particular, el NaALG se muestra como un macroligando más adecuado para recuperar PAP que BR.