Estudio del perfil de reparto de tripsina y quimotripsina en sistemas bifásicos acuosos de polietilenglicol y citrato de sodio.

TUBÍO GISELA; NERLI BIBIANA; PICÓ GUILLERMO

Rosario. ARGENTINA

Congreso; VII Congreso XXV Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario.; 2005

Sociedad de Biología de Rosario

La tripsina (TRP) es una proteasa muy empleada a nivel industrial y farmacológico que debe importarse en su totalidad a alto costo. Su fuente natural es el páncreas bovino, producto de desecho de la industria frigorífica. En este trabajo se evaluó la posibilidad de emplear los sistemas bifásicos acuosos (SBAs) para su aislamiento y purificación. Se estudiaron los perfiles de reparto de la enzima de interés (TRP) y su principal contaminante natural, la quimotripsina (QTRP) en sistemas bifásicos no tradicionales formados por polietilenglicol (PEG) y citrato de sodio (NaCit). Se analizó el efecto de distintas variables tales como: peso molecular promedio del polímero de cadena flexible (600-8000), composición del sistema (longitud de la línea de unión) y pH del medio (5.20-8.20) sobre el coeficiente de reparto (Kr) de cada enzima con el fin de encontrar las mejores condiciones de separación. Se calcularon los rendimientos teóricos en ambas fases. Se observó que para la mayoría de los sistemas ensayados la TRP presenta mayor tendencia a repartirse hacia la fase rica en el polímero que la QTRP. Para ambas proteínas el coeficiente de reparto disminuye al aumentar el peso molecular del PEG debido probablemente a un mecanismo de exclusión estérica. El incremento de la longitud de la línea de unión tuvo efecto diverso, produjo un desplazamiento hacia la fase rica en PEG para la proteína con Kr mayor a 1 y hacia la fase rica en citrato para aquella con Kr menor a la unidad. A pH 5.20 se observaron mayores cocientes entre los Krs de ambas proteasas respecto de los obtenidos a pH 8.20. Los resultados obtenidos mostraron que el sistema formado por PEG de peso molecular promedio 3350 y citrato de sodio a pH 5.2 exhibe las mejores propiedades separativas ya que permitiría aislar TRP en las fase rica en PEG en dos pasos extractivos con un significativo grado de pureza (80 % ). El rendimiento calculado a partir de los valores de Kr es bajo (31%) pero no representa un mayor inconveniente si se tiene en cuenta que la fuente natural de la proteína es abundante y  de bajo costo en nuestra región y que además en el proceso industrial la proteína repartida en la fase inferior podría ser reciclada.