Identificación y caracterización de” Calcyclin binding protein” de Toxoplasma gondii

ALOMAR, MARÍA LIS

Cordoba

Congreso; XXIV Reunión Científica Anual, Sociedad Argentina de Protozoología; 2010

SAP

Toxoplasma gondii es un parasito intracelular obligado, perteneciente al phylum apicomplexa. En el presente trabajo se pretende identificar y caracterizar una proteína de unión a calciclinas (Calcyclin binding protein, CBP) de T. gondii. Las proteínas CBP interactúan con calciclinas de la familia S100 y ésta interacción seria mediada por calcio. También interactúa con proteínas que intervienen en la formación del complejo cinetocoro. El conocimiento de su función podría desembocar en el conocimiento de la regulación del ciclo celular de T. gondii y de la diferenciación del mismo, como también en las posibilidades de obtener un nuevo blanco terapéutico contra la toxoplasmosis. Por dicha razón se rastreo en la base de datos, se identificaron 2 putativas proteínas una de ellas con la anotación de CBP. La proteína deducida consta de un dominio p23 y un dominio llamado SGS, el análisis de la secuencia muestra homología con la CBP humana y la Saccharomyces cerevisae. Se clonó un fragmento de 440 pb correspondiente al dominio SGS en pGEM-T y luego se subclonó en un vector de expresión procariota pRSET-C, se expresó como proteína recombinante, se genero el antisuero policlonal correspondiente. Dicho anticuerpo se probó mediante Western Blot utilizando extracto de taquizoitos donde observamos una banda de 45 KDa. Mediante ensayos de co-localización con anticuerpos marcadores de superficie se observo que CBP se presenta en forma de granulos dispersos en el citoplasma del parasito, indicando una localización en vesículas. El número de vesículas por célula es variado. La identidad de estas vesículas está en estudio.