INVESTIGADORES
GUGLIELMOTTI Daniela Marta
congresos y reuniones científicas
Título:
Polilisogenia en Lactobacillus casei/paracasei:evidencia de su existencia mediante técnicas moleculares
Autor/es:
MERCANTI, D.J.; CAPRA, M.L.; GUGLIELMOTTI, D. M.; REINHEIMER, J. A.; QUIBERON, A.
Lugar:
Córdoba, Argentina.
Reunión:
Congreso; III Congreso Internacional de Ciencia y Tecnología de los Alimentos; 2009
Resumen:
Como regla general, la producción de alimentos probióticos implica el uso de cepas cuidadosamente seleccionadas y altamente especializadas. Las infecciones fágicas en estos cultivos no pueden detectarse de manera directa por disminución en la acidificación, como ocurre con los fermentos primarios. Esto implica elevados riesgos tecnológicos y económicos para la industrial láctea. Asimismo, la amplia difusión de la lisogenia en cepas de Lactobacillus casei / paracasei es un peligro latente, existiendo antecedentes de la generación de fagos virulentos a partir de profagos. En este contexto, los fagos pMLC-A y CL se aislaron de cultivos puros de Lb. paracasei A lisados espontáneamente, y resultaron virulentos aún para la propia cepa. Su morfología permitió clasificarlos dentro de la familia Siphoviridae. Cuando Lb. paracasei A fue inducido con mitomicina C produjo la liberación de un profago (iA2), hecho confirmado por microscopía electrónica y aislamiento de ADN fágico. Los fagos pMLC-A y CL compartieron el espectro de huéspedes para las cepas ensayadas de Lb. paracasei (7 de 16) y Lb. casei (2 de 13), pero ninguna de ellas resultó infectada por el fago iA2, posiblemente defectivo, de acuerdo a las observaciones realizadas por microscopía electrónica. Los perfiles de restricción con BamHI, BglII y EcoRI demostraron que pMLC-A y CL eran fagos distintos pero evolutivamente relacionados, debido a la presencia de numerosos fragmentos de restricción comunes, mientras que el fago iA2 mostró perfiles muy diferentes. Un análisis Southern estableció una elevada homología de ADN entre los fagos pMLC-A y CL, evidenciada por hibridación cruzada total cuando se empleó la sonda correspondiente a cada uno de ellos, mientras que ambos presentaron una señal muy débil y en un único fragmento con el fago iA2, que tendría así un origen diferente. Por hibridación ADN-ADN se corroboró la presencia de este último dentro del genoma de Lb. paracasei A, y se observó además una señal adicional que podría corresponder a una secuencia repetida, o al remanente de un profago relacionado dentro del cromosoma. Además, se observaron fuertes evidencias de la presencia del ADN de los fagos pMLC-A y CL dentro del genoma de Lb. paracasei A, de manera que los mismos podrían tener un ancestro común que fue capaz de modificar su genoma y transformarse en virulento para la propia cepa. Adicionalmente, se logró la inducción con mitomicina C a partir de 3 cepas de colección de Lb. casei / paracasei, ratificando la alta diseminación de la lisogenia dentro de estas especies. Sorpresivamente, el fago liberado por las 3 cepas pareció ser el mismo, dado que se obtuvo un único perfil de restricción tanto para BamHI, BglII y EcoRI. Sin embargo, fue diferente de profagos previamente aislados a partir de dos de dichas cepas, evidencia de la ocurrencia de polilisogenia en las mismas.