Identificación molecular de un compuesto antimicrobiano tipo bacteriocina producido or una cepa de Leuconostoc citreum

PUJATO, S. A.; GUGLIELMOTTI, D. M.; QUIBERONI, A.

Santa Fe, Argentina

Simposio; II Simposio Argentino de Lactología; 2012

Entre las bacterias lácticas se incluye al género Leuconostoc, constituido por bacterias de morfología cocoide o cocobacilares, Gram positivas, productoras de gas (CO2). Algunas especies de Leuconostoc tienen importancia en la industria láctea fermentativa, donde son usadas en combinación con cepas de Lactococcus para estimular la producción de compuestos de flavour en cultivos iniciadores mixtos. En los últimos años, numerosas cepas fueron aisladas a partir de muestras de quesos blandos con defectos gasógenos. Una de las cepas analizadas demostró la capacidad de producir una sustancia de naturaleza proteica, termorresistente, no ácida, del tipo bacteriocina, capaz de inhibir el desarrollo de Listeria sp., la cual podría ser una herramienta natural para controlar el desarrollo de microorganismos alterantes y/o patógenos de los alimentos.El presente trabajo tuvo por objetivo la identificación de bacteriocinas anti-Listeria producidas por Leuconostoc citreum MB1. En primer lugar,  se procedió a la extracción del ADN total bacteriano, el cual fue sometido a reacciones de amplificación mediante PCR utilizando diversos oligonucleótidos iniciadores (primers) seleccionados y/o diseñados durante este trabajo. Estos primers son específicos para las diversas leucocinas y mesentericinas conocidas: LcnK, LcnA, LcnQ, LcnB, LcnN, LcnATA, MesB, MesY, MesG,  MesH, MesI, MesF, MesC, MesD, MesE y UviB. Aquellos productos que resultaron positivos (presencia de una o más bandas) fueron purificados y secuenciados. Las secuencias obtenidas fueron  analizadas utilizando programas específicos (BioEdit) y comparadas con secuencias depositadas en bancos de datos mediante la herramienta BLAST de NCBI (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi), con el objetivo de establecer grados de similitud entre las mismas y lograr su clasificación dentro de los grupos ya conocidos. Entre los primers utilizados en reacciones de PCR, se obtuvieron productos de amplificación del tamaño esperado para las bacteriocinas UviB (aprox. 300 pb) y LcnA (aprox. 200 pb), observándose  un  97 %  y  91% (respectivamente) de similitud con las respectivas secuencias presentes en GenBank (Nº de acceso YP_001728928 y AF036713, respectivamente). Con los demás primers no se obtuvieron productos de amplificación.Estos resultados nos permiten estimar la capacidad de  Leuconostoc citreum MB1 de poder sintetizar al menos una de estas dos bacteriocinas clase IIa anti-Listeria. El aprovechamiento de las mismas es un campo con gran potencial de explotación por parte de la industria alimenticia, constituyendo una herramienta natural para controlar el desarrollo de Listeria en los alimentos.