Caracterización de los receptores de estrógenos asociados a membrana en células adenohipofisarias

ZÁRATE SANDRA; JAITA GABRIELA; FERRARIS JIMENA; EIJO GUADALUPE; PISERA DANIEL; SEILICOVICH ADRIANA

Mar del Plata

Congreso; LVI Reunión de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2011

En la adenohip¨®fisis, los estr¨®genos regulan diversas funciones celulares mediante mecanismos cl¨¢sicos y no cl¨¢sicos. Estos ¨²ltimos involucran la activaci¨®n de receptores de estr¨®genos (ERs) asociados a la membrana plasm¨¢tica. Previamente hemos demostrado que tanto el estradiol (E2) como conjugados de E2 y macromol¨¦culas, los cuales no difunden hacia el interior de la c¨¦lula, inducen una r¨¢pida respuesta apopt¨®tica en c¨¦lulas adenohipofisarias, lactotropos y somatotropos. El antagonista de ERs cl¨¢sicos, ICI 182,780, revierte completamente este efecto, indicando que la activaci¨®n de estos receptores asociados a la membrana plasm¨¢tica estar¨ªa involucrada en el efecto proapopt¨®tico del E2. En el presente trabajo, determinamos las variantes del receptor de estr¨®genos alfa (ER¦Á) asociadas a la membrana plasm¨¢tica de c¨¦lulas adenohipofisarias. A partir de cultivos primarios de c¨¦lulas adenohipofisarias provenientes de ratas hembras Wistar adultas, obtuvimos extractos enriquecidos en prote¨ªnas de membrana por biotinilaci¨®n de la superficie celular, los cuales fueron analizados por Western Blot. Utilizando un anticuerpo dirigido hacia el dominio carboxilo-terminal del ER¦Á, identificamos la presencia de tres isoformas del receptor, una de 67 kDa (mER¦Á67), otra de 39-41 kDa y otra de 21-22 kDa. Tambi¨¦n evaluamos si el E2 regula esta asociaci¨®n entre el receptor y la membrana de manera dependiente del tiempo. Incubamos cultivos primarios de c¨¦lulas adenohipofisarias provenientes de ratas ovariectomizadas con E2 1 nM durante 0-120 min, realizando un an¨¢lisis similar de biotinilaci¨®n de superficie celular y Western Blot. El E2 aument¨® la expresi¨®n de mER¦Á67 en forma transitoria, observ¨¢ndose niveles m¨¢ximos a los 30 min de incubaci¨®n (ANOVA de una v¨ªa, p<0.05). Estos resultados sugieren que el E2 podr¨ªa afectar de forma r¨¢pida la respuesta de las c¨¦lulas adenohipofisarias mediante cambios en la expresi¨®n de los ER asociados a la membrana celular.