INVESTIGADORES
ROZENFELD Paula Adriana
congresos y reuniones científicas
Título:
APOPTOSIS AUMENTADA POR TRATAMIENTO CON GLOBOTRIAOSILCERAMIDA (Gb3) SOBRE CÉLULAS MONONUCLEARES DE SANGRE PERIFÉRICA. IMPLICANCIAS PARA LA ENFERMEDAD DE FABRY
Autor/es:
DE FRANCESCO, PN; FOSSATI CA; ROZENFELD PA
Lugar:
Mar del Plata
Reunión:
Congreso; LIV Reunión anual de SAIC; 2009
Institución organizadora:
Sociedad Argentina de Investigación Clínica
Resumen:
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La globotriaosilceramida (Gb3) es
un glicolípido neutro que se acumula en la Enfermedad de Fabry
(EF), una enfermedad de almacenamiento lisosomal causada por la deficiencia de
la enzima α-galactosidasa A. Los valores plasmáticos de Gb3 en pacientes con EF
se hallan en el rango de 2 a
50 μM, mientras que en individuos sanos son menores a 1,2 μM. Resultados
preliminares de nuestro grupo indicarían la existencia de un estado
proapoptótico en células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de pacientes
con EF.
En el presente trabajo se
investiga los efectos del tratamiento con Gb3 sobre los niveles de apoptosis de
PBMC normales.
Partiendo de sangre periférica de
sujetos normales, se aislaron PBMC mediante un gradiente de ficoll, y se
cultivaron en presencia de Gb3 variando el rango de concentraciones de 0 a 40 μM, por 48 hs, y a una concentración
fija de 20 μM por diferentes tiempos, hasta 48 hs. Posteriormente se procedió a
analizar los niveles de apoptosis de estas células mediante las técnicas de
Anexina-V y TUNEL por citometría de flujo. También se determinó el grado de
despolarización de la membrana mitocondrial (DMM) mediante JC-1.
En la cinética del tratamiento
con Gb3 se observó un aumento en los niveles de apoptosis en linfocitos y
monocitos, alcanzando los valores máximos a las 6 hs para Anexina-V y 48 hs
para TUNEL. Asimismo, el agregado de Gb3 produjo una DMM que fue máxima a las 6
hs. Los experimentos de dosis-respuesta con Gb3 mostraron una dependencia de
los niveles de DMM y apoptosis en linfocitos y monocitos al aumentar la dosis.
Estos hallazgos muestran un
efecto directo de dosis patológicamente elevadas de Gb3 sobre la fisiología de
las PBMC, que podría sugerir una relación causal con la apoptosis observada en
pacientes. La observación de la disrupción del potencial mitocondrial mediante
JC-1 indicaría la activación de la vía intrínseca de apoptosis como mediadora
de este proceso.
