Producción de citoquinas proinflamatorias por tratamiento con Gb3 y DGJ en células dendríticas y macrófagos derivados de PBMC normales. Implicaciones para la fisiopatología de la Enfermedad de Fabry

DE FRANCESCO, PN; MUCCI JM; CECI R; ROZENFELD PA

Congreso; Reunión anual de SAIC-SAFIS-AACYTAL 2012; 2012

La enfermedad de Fabry (EF) es un desorden genético X-ligado, caracterizado por la deficiencia en la actividad de la enzima lisosomal α-galactosidasa A (αGal), que conduce a la acumulación de glicolípidos neutros, principalmente globotriaosilceramida (Gb3). Se ha sugerido la existencia de un estado proinflamatorio crónico como uno los factores de su fisiopatología. Resultados previos de nuestro grupo mostraron una producción y expresión aumentada de citoquinas proinflamatorias en células mononucleares de sangre periférica (PBMC) de pacientes con EF, y en particular en células dendríticas (DC) y monocitos (M). El objetivo del presente trabajo es investigar los efectos del Gb3 y del DGJ, un inhibidor de αGal, sobre la producción de citoquinas en DC y macrófagos (MΦ) derivados de PBMC normales. Partiendo de buffy coats normales, se aislaron PBMC en gradiente de ficoll, para purificar M por adhesión en cultivo de 1h. Los M obtenidos se cultivaron por 6 días en presencia de GM-CSF e IL-4, o M-CSF, para diferenciarlos a DC o Mφ, respectivamente. Se cultivaron luego las DC y MΦ obtenidos por 24 hs en presencia o ausencia de Gb3 20µM, DGJ 200µM y/o LPS 1µg/ml, y se analizaron los niveles de IL-β, IL-6 y TNF en los sobrenadantes. Tanto en los cultivos de DC como de MΦ se observó un aumento significativo en la producción de IL-1β y TNF, respecto del control, solo si se trataba conjuntamente con Gb3 y DGJ, (DC p=0,0018 y p=0,0041; MC p=0,0002 y p=0,0054, respectivamente). Se observó una tendencia similar para IL-6. No pudieron observarse diferencias significativas entre los cultivos que tuvieron el agregado adicional de LPS. Estos resultados muestran que mediante el agregado conjunto de Gb3 y DGJ en cultivos normales de las dos subpoblaciones estudiadas se puede inducir un estado proinflamatorio similar al observado en PBMC de pacientes con EF, lo que indicaría que los niveles elevados de Gb3 están directamente implicados en la fisiopatogenia del estado proinflamatorio en la EF.