Transcitosis de vesículas extracelulares producidas por la cepa probiótica Bacillus subtilis 168 en un modelo in vitro de barrera intestinal

ANA PAULA DOMINGUEZ RUBIO; JIMENA H.MARTINEZ; MARCOS PALAVECINO; MARIANA PIURI; OSCAR E. PEREZ

Simposio; 3ra Reunión de Jóvenes Investigadores de Ciencia y Tecnología; 2018

UNQUI

Dentro de los alimentos funcionales, los probióticos cobran relevancia en el marcode la comunicación interreino procariotas-eucariotas, aunque, los mecanismos por los cuales la microbiota gastrointestinal influye en el hospedador siguen sin estar claros. Las vesículas extracelulares (VEs) son una forma de comunicación extracelular y se les ha atribuido participación en la comunicación interreino. Las VEs de las bacterias Gram-positivas se encuentran en la nanoescala (30-300 nm) y contienen DNA, RNA y proteínas. Nuestra hipótesis es que las VEs tienen la capacidad de atravesar el epitelio intestinal y llegar al torrente sanguíneo del hospedador, y así a sus órganos y tejidos blancos. Se estudió la capacidad de las VEs producidas por B. subtilis 168 de atravesar células epiteliales intestinales humanas en monocapa. B. subtilis 168 se cultivó en medio BHI a 37ºC bajo agitación durante 18 hs, se aislaron sus VEs por ultracentrifugación y se marcaron con éster de succinimidil-carboxifluoresceína. Se estudió la internalización de VEs mediante el número de VEs dentro de las células diferenciadas a su forma enterocítica mediante Microscopía Confocal (MC). Además, se estudió la transcitosis de las VEs por la fluorescencia medida en el medio recogido de la cámara inferior del transwell y su análisis por MC.Dentro de los alimentos funcionales, los probióticos cobran relevancia en el marcode la comunicación interreino procariotas-eucariotas, aunque, los mecanismos por los cuales la microbiota gastrointestinal influye en el hospedador siguen sin estar claros. Las vesículas extracelulares (VEs) son una forma de comunicación extracelular y se les ha atribuido participación en la comunicación interreino. Las VEs de las bacterias Gram-positivas se encuentran en la nanoescala (30-300 nm) y contienen DNA, RNA y proteínas. Nuestra hipótesis es que las VEs tienen la capacidad de atravesar el epitelio intestinal y llegar al torrente sanguíneo del hospedador, y así a sus órganos y tejidos blancos. Se estudió la capacidad de las VEs producidas por B. subtilis 168 de atravesar células epiteliales intestinales humanas en monocapa. B. subtilis 168 se cultivó en medio BHI a 37ºC bajo agitación durante 18 hs, se aislaron sus VEs por ultracentrifugación y se marcaron con éster de succinimidil-carboxifluoresceína. Se estudió la internalización de VEs mediante el número de VEs dentro de las células diferenciadas a su forma enterocítica mediante Microscopía Confocal (MC). Además, se estudió la transcitosis de las VEs por la fluorescencia medida en el medio recogido de la cámara inferior del transwell y su análisis por MC.