Participación del inhibidor del ciclo celular, p19INK4d, en el proceso de diferenciación de células derivadas de neuroblastoma, SH-SY5Y por ácido retinoico

SCASSA, M. E.; OGARA, M. F.; VERMAL AZCONA, C.; CÁNEPA, E.T.

Mar del Plata, Provincia de Buenos Aires, Argentina

Congreso; LI REUNIÓN CIENTÍFICA ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE INVESTIGACIÓN CLÍNICA (SAIC); 2006

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

La línea celular de neuroblastoma SH-SY5Y se diferencia a células que resultan bioquímica, ultraestructural y electrofisiológicamente similares a neuronas cuando se las estimula con agentes diferenciantes tales como los retinoides. Un evento crucial para la diferenciación terminal es la salida permanente del ciclo celular, la cual requiere la inactivación de quinasas dependientes de ciclinas (CDKs). Esta inactivación es debida en gran parte a la acción de polipéptidos inhibidores de CDKs (CKIs). Dos familias de CKIs han sido identificadas en mamíferos. Una de ellas, la INK4, compuesta por p16, p15, p18 y p19. La otra, la Cip/Kip integrada por p21, p27 y p57. Dada la necesidad de esta salida del ciclo celular y resultados del análisis in silico del promotor de p19 que revelaron la presencia de una secuencia en la posición -311 al -292 pb con alta homología a los RARE, estudiamos la regulación de este gen a lo largo del proceso de diferenciación de células SH-SY5Y estimuladas con ácido retinoico. En ensayos de Northern y Western blot observamos dos picos de inducción de p19, uno al segundo día y otro, sostenido en el tiempo, a partir del séptimo día postratamiento, mientras que la inducción de p27 (molécula esencial para la neurogénesis) se produjo y mantuvo luego del primer día. Mediante ensayos de EMSA y de desplazamiento competitivo usando oligonucleótidos conteniendo el RARE de p19 detectamos la unión específica de proteínas nucleares a este elemento. En este estudio comprobamos que la expresión de p19 como la de p27 permanece elevada en neuronas diferenciadas. Sin embargo, el tratamiento con el péptido beta-amiloide produjo una significativa reducción del mRNA de p27 en concordancia con la necesidad que presentan las neuronas de re-entrar al ciclo para morir por apotosis frente a insultos genotóxicos, mientras que los niveles del mRNA de p19 permanecieron invariantes. Estos hallazgos nos permiten proponer una función para p19 en la neurogénesis.