Mecanismo del estrés oxidativo provocado por el cromo hexavalente en dos cepas de Euglena gracilis

IARA ROCCHETTA

Buenos Aires

Jornada; Jornadas de Fisología Vegetal 2003; 2003

Universidad de Buenos Aires

Euglena gracilis ha mostrado tanto cambios morfológicos como metabólicos en respuesta a diferentes situaciones de estrés y en particular a la acción de metales pesados.  Estos agentes tóxicos  pueden generar en la célula un exceso de  radicales libres (el radical superóxido, hidróxilo, peróxido de hidrógeno y oxigeno singulete activado) causando severos daños.  El estrés oxidativo tiene lugar en las células cuando las defensas antioxidantes resultan insuficientes para contrarrestar esta acción. En trabajos previos observamos que al someter dos cepas de E. gracilis, una aislada de un río altamente contaminado, Matanza, (MAT) y otra de cepario (UTEX 364), crecidas con diferentes concentraciones de cromo hexavalente y en diferentes medios de cultivo, el efecto del tóxico estuvo totalmente relacionado con las condiciones de desarrollo.  En todos los casos se pudo observar que la cepa MAT presentaba una mayor resistencia al metal.  En base a estos resultados, nos proponemos estudiar cual es el mecanismo del estrés oxidativo provocado por el cromo hexavalente en estas dos cepas de E. gracilis crecidas bajo diferentes condiciones de cultivo. Para ello estudiamos la actividad antioxidante de enzimas atrapantes de radicales libres tales como la superóxido dismutasa, catalasa y glutation peroxidasa. También se determinó el contenido de antioxidantes de bajo peso molecular como el glutation y el ß caroteno. Evaluamos el daño oxidativo lipídico mediante la producción de TBARS, el contenido de dienos conjugados y la naturaleza de los ácidos grasos en función del tóxico. Se midió el contenido de carbonilos como un indicador del daño de proteínas. Tendiendo a esclarecer los mecanismos implicados en el estrés por cromo, utilizamos una técnica colorimétrica para la detección de especies reactivas de radicales libres, anión superóxido y peróxido de hidrógeno, y se estudiará el daño a ADN mediante el análisis de núcleos apoptóticos. Utilizando técnicas de microscopía electrónica se tratará de determinar el lugar donde el cromo hexavalente se deposita dentro de la célula y con absorción atómica se determinará la especiación del cromo (Cr III o CrVI). El conocimiento del mecanismo por el cual actúa el cromo hexavalente, nos permitirá esclarecer el accionar sobre la célula de este metal del cual se sabe muy poco hasta el momento. Podremos observar la reacción de la célula frente a una situación de estrés oxidativo, comparar las respuestas entre ambas cepas teniendo en cuenta el origen de cada una y como influyen las distintas condiciones de cultivo utilizadas. Por último nos proponemos evaluar en las células controles la producción de estas sustancias antioxidantes y la naturaleza de los lípidos algales, algunos de los cuales poseen alto valor comercial.