ANALISIS DE LAS SECUENCIAS DE LAS PROTEINAS NO ESTRUCTURALES EN CEPAS LOCALES DE PARVOVIRUS CANINO

GALLO CALDERÓN, M; ROMANUTTI, C; KELLER, L; GRIPPO V; MATTION, N; LA TORRE, J

Jornada; XV Jornadas Argentinas de Microbiología; 2014

Asociación Argentina de Microbiologia

P - 160 Área: Virología básica Autores: Gallo Calderón, M.; Romanutti, C.; Keller, L.; Grippo, V.; Mattion, N.; La Torre, J. Institución: Instituto de Ciencia y Tecnologia Dr Cesar Misltein ANALISIS DE LAS SECUENCIAS DE LAS PROTEINAS NO ESTRUCTURALES EN CEPAS LOCALES DE PARVOVIRUS CANINO INTRODUCCION: el Parvovirus Canino (PVC) es un virus altamente contagioso, que provoca gastroenteritis hemorrágicas severas en cachorros, con altas tasas de morbilidad y mortalidad. Es un virus pequeño, no envuelto, con estructura icosaédrica, y su genoma a ADN monocatenario, es de aproximadamente 5200 nucleótidos, y de polaridad negativa. El mismo, codifica para 2 proteínas estructurales (VP1 y VP2) y 2 proteínas no estructurales (NS1 y NS2). Desde su primer aislamiento en 1978, el PVC ha sufrido cambios antigénicos. Las variantes PVC-2a, PVC-2b, y PVC-2c reemplazaron secuencialmente a la cepa original PVC-2 (presente en la mayoría de las vacunas comerciales). Estas variantes se han descripto en relación a cambios aminoacídicos con respecto a la cepa original, en la proteína de la cápside, VP2. En trabajos previos, hemos analizado las secuencias de la VP2 y reportado la presencia de estas 3 variantes antigénicas en nuestro país, pero poco se conoce acerca de las secuencias de las proteínas no estructurales del virus, las cuales, son esenciales para la replicación viral, la infección lítica, y tienen diversas funciones, tales como ATPasa, ADN helicasa, y de transactivación del promotor P38 evidenciando un rol oncosupresor. Se sabe además, que las proteínas NS están altamente conservadas entre los parvovirus. OBJETIVO: el objetivo del presente trabajo, fue clonar, secuenciar y analizar las secuencias de los genes completos de las proteínas no estructurales (NS1) de cepas Argentinas de PVC. MATERIALES Y MÉTODOS: a partir de hisopados rectales tomados de 3 perros con sintomatología clínica compatible con PVC, se extrajo el ADN. Cada muestra es acompañada de un formulario con información referida al animal tal como: sintomatología, historial de vacunaciones, sexo, edad, etc. Para el diagnóstico molecular, se amplificó por PCR, un fragmento de 583 pares de bases (pb) del gen de la VP2. Además, se amplificaron por PCR los genes completos de las proteínas NS1. Los fragmentos obtenidos, fueron clonados en PgemT easy vector y secuenciados por Macrogen Inc (Corea). Las secuencias obtenidas, se analizaron y alinearon utilizando el programa Clustal W. RESULTADOS: la comparación de las secuencias del gen completo de las proteínas NS1, obtenidas de cepas locales, mostraron un porcentaje de homología ≥ 99.2% entre sí. El alineamiento a nivel aminoacídico, mostró un porcentaje de identidad ≥ 99.4% de la cepa Argentina (PVC-2b) con respecto a la cepa vacunal (PVC-2). CONCLUSIONES: se analizaron por primera vez en Argentina, las secuencias de los genes completos de las proteínas NS de las diferentes variantes antigénicas del PVC, confirmándose el alto grado de homología en esta proteína y evidenciando que mutaciones en esa región del genoma, son deletéreas.