Construccion de una biblioteca combinatorial de Ac de un paciente con cardiomiopatia cronica de Chagas

GRIPPO VANINA; MAHLER E; RUIZ A; MADOERY C; TENTORI MC; LEVIN MJ

Congreso; XLVII Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Investigaciones clinicas - L Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Inmunologia; 2002

Pacientes con cardiomiopatía crónica chagásica (CCCh) presentan Ac dirigidos contra las proteínas ribosomales P de T.cruzi (Ac anti-P) que poseen la propiedad de estimular receptores cardiovasculares. El componente patogénico de estos Ac se evidenció en modelos de inmunización murinos y para Ac policlonales purificados a partir de sueros de pacientes con CCCh. La complejidad estructural y funcional de la respuesta humoral anti-P nos llevó a construir una biblioteca combinatorial de Ac a partir de médula ósea de un paciente con CCCh que posee Ac con actividad funcional sobre receptores 1-AR y M2-ChR. A partir de la médula se preparó ARN total y se sintetizó el ADNc. Con primers específicos se amplificaron las regiones variables de cadenas pesadas (VH) y livianas (V y V). Con dos reacciones de “overlap-PCR” se construyeron los fragmentos Fab. Estos se clonaron en el vector pComb3x y se electroporaron en  E.coli XL1-Blue. El tamaño de la biblioteca fue de 1x108ufc/g. Se procedió al rastreo de la biblioteca aprovechando la afinidad de los fagos que expresan los Fab por antígenos de T.cruzi y sus proteínas ribosomales P. Se identificaron y caracterizaron clones reactivos anti-P que compitieron eficientemente con un anticuerpo monoclonal anti-P por el mismo epítope. Esta es la primera biblioteca combinatorial de Ac de un paciente con enfermedad de Chagas y es la base para obtener Ac monoclonales humanos contra antígenos relevantes de T.cruzi.