INVESTIGADORES
GRIPPO vanina
congresos y reuniones científicas
Título:
Obtencion y caracterizacion de Anticuerpos (Acs) recombinantes humanos contra antigenos de T. cruzi
Autor/es:
GRIPPO VANINA; G¨®MEZ KA; NIBORSKI LL; LEVIN MJ
Reunión:
Congreso; VII Congreso Argentino de ProtozoologIa y enfermedades parasitarias; 2005
Resumen:
Pacientes con cardiomiopatIa cronica de Chagas (CCCh) presentan Acs dirigidos contra las proteInas ribosomales P de T. cruzi (Acs anti-P) que poseen la propiedad de estimular receptores cardiovasculares. La complejidad de la respuesta humoral anti-P nos llevo a construir una biblioteca combinatorial de Acs de un paciente con CCCh que posee Acs con actividad funcional sobre el receptor M2-ChR. A partir de  medula osea se preparo ARN total y se sintetizo el ADNc. Se amplificaron las regiones variables (VH, Vk y Vl) y por overlap-PCR se obtuvieron los fragmentos scFvs. Estos se clonaron en el fagemido pComb3x y se electroporaron en  E.coli XL1-Blue. El rastreo de la biblioteca se realizo por phage display contra lisado total de epimastigotes, proteinas ribosomales P2b y P0 y peptidos derivados de dichas proteinas (R13 y P018). La reactividad de clones especificos anti-T.cruzi y anti-P se evidencio por ELISA y Western Blot. La diversidad de los mismos se analizo por digestion con la enzima de restriccion BstOI y secuenciacion. La mayoria de los clones aislados contra el peptido R13 (extremo C-terminal de la proteina ribosomal P2b) tuvieron el mismo perfil de digestion y resultaron ser iguales a un clon aislado contra dicha proteina. Por otro lado, todos los clones anti-P0 y anti-T.cruzi aislados presentaron perfiles totalmente distintos. Ademas, se analizo  la distribucion de familias VH entre los clones anti-T.cruzi y  anti-P y se comparo con autoanticuerpos anti-P de pacientes lupicos. Este trabajo presenta la primer caracterizacion de Acs recombinantes humanos contra antigenos relevantes de T. cruzi y constituye una herramienta fundamental en el estudio de esta enfermedad.