INVESTIGADORES
GRIPPO vanina
congresos y reuniones científicas
Título:
Obtencion y caracterizacion de anticuerpos recombinantes derivados de bibliotecas combinatoriales de pacientes con Cardiopatia Cronica de Chagas (CCCh) contra antigenos de Trypanosoma cruzi
Autor/es:
GRIPPO VANINA; NIBORSKI LL; RAATS J; LEVIN MJ
Reunión:
Congreso; XXII Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Protozoologia; 2007
Resumen:
La complejidad de la respuesta humoral anti-Trypanosoma cruzi (T.cruzi) nos llevó a construir bibliotecas combinatoriales de anticuerpos (Acs) de distintos pacientes con CCCh. A partir de medula osea de pacientes, se preparo ARN total y se sintetizo el ADNc. Se amplificaron las regiones variables (VH, Vk y Vl y  se clonaron en el fagemido pHen. De esta forma, se obtuvieron los fragmentos de Acs (scFv) completos y se electroporaron en la cepa E.coli TG-1. El rastreo de la biblioteca se realizo por phage display contra lisado total de epimastigotes de T.cruzi. Se obtuvieron clones reactivos contra lisado total de T.cruzi por ELISA. La diversidad de los mismos se analizo por digestion con la enzima de restriccion BstNI y secuenciacion. Un grupo de Acs pertenecientes a la familia VH 3-30*18 reacciono con una proteina de m¨¢s 175 Kda en Western blot de epimastigotes de T.cruzi. La misma proteina es reconocida por el suero del paciente del que se derivo la biblioteca. La reactividad de estos Acs se evidencio tambien por inmunofluorescencia indirecta contra el parasito. Este trabajo presenta la primer caracterizacion de Acs recombinantes humanos contra T.cruzi. Estos podrian constituir una herramienta fundamental para el estudio de la enfermedad.