Estudio de factibilidad de anticuerpos de dominio único derivados de camélidos (VHH o Nano-anticuerpos) como anticuerpos de captura en un ELISA de bloqueo en fase líquida para detectar anticuerpos inducidos tras la vacunación contra el VFA

BOZZO J; MARCHESE F; GRIPPO V

Virtual

Congreso; XIII Congreso Argentino de Virología 2021; 2021

Sociedad Argentina de Virología

La Fiebre Aftosa (FA) es una enfermedad viral del ganado con un alto impacto económico. En Argentina, la potencia de la vacuna se controla por un ELISA de bloqueo en fase líquida (FL-ELISA). Este ensayo mide el título de anticuerpos (Acs) específicos contra el Virus de la FA (VFA) en suero de animales vacunados, utilizando suero de conejo (SC) como Ac de captura. Por otro lado, los Acs de dominio único derivados de camélidos (NanoAcs o VHH) revolucionaron el campo de los Acs monoclonales presentando alta especificidad, afinidad, estabilidad y fácil producción. Por esto, el uso de VHH como captura podría proporcionar una mejor reproducibilidad entre lotes y simplificar su producción. Por esta razón, nos propusimos estudiar el uso de NanoAcs como Acs de captura en este FL-ELISA. Para ello, dos llamas fueron inmunizadas con la vacuna anti-VFA y a partir de su sangre se construyeron bibliotecas de VHH. Se seleccionaron VHH específicos contra la cepa vacunal O1/Campos (O1C) por la metodología Phage Display. Luego, se estudiaron los 4 NanoAcs más reactivos como Acs de captura en FL-ELISA, utilizando reactivos estandarizados del FL-ELISA del Servicio Técnico de CEVAN. Como resultado, los 4 VHH fueron capaces de capturar el Ag. La mayor captura fue observada con el VHH 2F1, siendo comparable al SC. Por esta razón, se estudió el VHH 2F1 como Ac de captura en un VHH FL-ELISA y se comparó con el SC FL-ELISA. Se determinó el título de Acs en sueros de animales vacunados por ambos ELISA y se analizó su concordancia mediante el método de Band-Altman. El coeficiente de correlación fue de 0,97 (IC 95%=0,98-0,95) indicando una muy alta concordancia entre ambos métodos.En conclusión, los 4 VHH fueron capaces de capturar la cepa O1C en ELISA. El VHH FL-ELISA, utilizando el VHH 2F1 como Ac de captura, mostró resultados comparables al SC FL-ELISA. Por lo tanto, este VHH FL-ELISA tiene el potencial de ser utilizado para medir los Acs inducidos en bovinos por las vacunas contra la FA.