Estudio de la utilización de anticuerpos de dominio único derivados de camélidos (VHH o nanoanticuerpos) como anticuerpos de captura en ELISA-BFL empleado para el control de la potencia de la vacuna anti-aftosa

BOZZO J; MARCHESE F; MALIRAT V; GRIPPO V

Virtual

Jornada; X Jornadas de Jóvenes Investigadores; 2021; 2021

La Fiebre Aftosa (FA) es una enfermedad viral del ganado de alto impacto económico. Existen siete serotipos del Virus de la FA (VFA), habiendo circulado en el país los serotipos O, A, y C. Según la OIE, Argentina es un país libre de FA, con zonas donde se aplica y donde no se aplica la vacuna. La potencia de la misma se controla por un ELISA de Bloqueo en Fase Líquida (ELISA-BFL) que mide el título de Acs específicos anti-VFA en el suero de animales vacunados. Este ensayo emplea suero de conejo (SC) como anticuerpo (Ac) de captura. El reemplazo del suero por Acs monoclonales (mAcs) brindaría mayor reproducibilidad entre lotes y simplificaría el escalado de la producción de Acs idénticos, entre otras ventajas. Por otro lado, los Acs de dominio único derivados de camélidos (nanoanticuerpos o VHH) han revolucionado el campo de los mAcs, presentando alta especificidad y afinidad por el antígeno (Ag), y propiedades únicas como alta estabilidad y simple producción. Por esta razón, este trabajo tuvo como objetivo estudiar el uso de VHH específicos contra la cepa vacunal O1/Campos (O1C) como Acs de captura en el ELISA-BFL implementado en el control de potencia de la vacuna anti-FA. Con tal objetivo se seleccionaron VHH específicos contra la cepa O1C por Phage Display, a partir de bibliotecas de NanoAcs de 2 llamas inmunizadas con la vacuna. De esta selección, se eligieron 4 VHH para estudiar su uso como Acs de captura.Se estudió la capacidad de captura del Ag viral O1C por parte de los VHH en ELISA, comparándolo con la captura del SC homólogo a O1C. Como resultado, los 4 VHH fueron capaces de capturar el Ag. Para determinar las concentraciones óptimas de captura de los VHH y del Ag, se realizó un análisis bidimensional por ELISA. Se observó el mayor nivel de captura con el VHH 2F1 a una concentración de 10 µg/ml, alcanzando una captura similar a la del SC. Por este motivo se estudió al VHH 2F1 como Ac de captura en un VHH ELISA-BFL. Se calibró el ensayo ajustando la dilución de Ag viral acorde a los títulos de sueros estándares. Por último, se comparó el desempeño entre el VHH ELISA-BFL y ELISA-BFL. Se determinó el título de Acs de 81 sueros de animales vacunados por ambos ELISA y se analizó su concordancia por el método de Band-Altman. Se obtuvo una alta concordancia cuyo coeficiente de correlación (CCC) fue de 0,97 (IC95% = 0,98-0,95). Más aún, no se observó sesgo sistemático, ni desviación sistemática neta a lo largo del rango de valores obtenidos. Los Límites de Acuerdo (LDA) obtenidos indican que en el 95% de los casos, la diferencia entre los resultados será menora 0,2. En conclusión, los 4Nanoanticuerpos fueron capaces de capturar el Ag en ELISA, siendo el VHH 2F1 el quepresentó los mayores niveles de captura. Su implementación como Ac de captura en elVHH ELISA-BFL, mostró resultados comparables a los del ELISA-BFL. De este modo,el VHH 2F1 aumentaría la reproducibilidad y simplificaría las condiciones de captura enELISA-BFL utilizada para el control de la potencia de la vacuna.