INVESTIGADORES
ISLA Maria Ines
congresos y reuniones científicas
Título:
Capacidad antioxidante de proteínas inhibidoras de glicosidasas
Autor/es:
ORDOÑEZ R., SAYAGO J., NIEVA MORENO M.I., ISLA M.I.
Lugar:
Buenos Aires. Argentina
Reunión:
Congreso; Congreso Internacional. Grupo Biotecnología. VI Simposio Nacional de Biotecnología. REDBIO Argentina 2005. Encuentro tradicional REDBIO Argentina. Chile. Uruguay. Buenos Aires.; 2005
Institución organizadora:
REDBIO Argentina. Chile. Uruguay.
Resumen:
Introducción En trabajos previos, aislamos y purificamos a partir de frutos maduros de Cyphomandra betacea (tomate de árbol) y de tubérculos de Solanum tuberosum proteínas inhibidoras de la actividad de invertásas ácidas solubles (PII) y demostramos que estos polipéptidos actúan como inhibidores de enzimas hidrolíticas producidas por hongos y bacterias fitopatógenicas y presentan  actividad inhibitoria del crecimiento bacteriano (Isla et al, 2002). Por ello propusimos su participación en los mecanismos de defensa de las plantas.  La oxidación de los ácidos grasos insaturados en las membranas biológicas lleva a la formación y propagación de radicales lipídicos, captación de oxigeno, reordenamiento de doble ligaduras en lípidos insaturados y la eventual destrucción de lípidos de membrana. El anión superóxido y el radical libre hidroxilo participan activamente en la iniciación de la peroxidación de lípidos. Los productos de oxidación de los lípidos pueden reaccionar a su vez con las  proteínas y producir su oxidación. El objetivo de este trabajo fue evaluar la capacidad antioxidante total y la capacidad depuradora de radicales libres de las PII aisladas y purificadas de frutos de tomate de árbol y de tubérculos de papa. Metodología A partir de frutos maduros (95 días después de la antesis) de tomate de árbol y de tubérculos de papa se aisló y purificó una PII de acuerdo a lo descripto por Ordóñez et al., 2000; Isla et al., 2002.   Se evaluó la capacidad depuradora del radical libre DPPH (difenilpicrilhidrazil),anión superóxido (Xantina/xantina oxidasa/azul de tetrazolium/EDTA), radical libre hidroxilo (deoxiribosa/FeCl3/  EDTA/ áci-do ascórbico / H2O2) y peróxido de hidrógeno. Se comparó la actividad de las proteínas frente a antioxidantes sintéticos (hidroxitolueno butilado) y naturales (ácido ascórbico y quercetina). Resultados y Discusión Las PII aisladas de tomate de árbol y de tubérculos de papa se comportaron como  depuradores de los radicales libres superóxido e hidroxilo. La actividad depu-radora fue dosis dependiente siendo más efectiva sobre el radical hidroxilo que sobre el radical superóxido (Fig. 1 y 2). La concentración necesaria para depurar el 50% de los radicales (CD50) fue de 30-60 µg.ml-1 para la PII aislada de tomate de árbol y de 80-100 µg.ml-1 para la PII aislada de tubérculos de papa. Ninguna de las PII mostró actividad prooxidante y ambas se comportaron como débiles depuradoras de peróxido de hidrógeno. Actuaron como antioxidantes primarios ya que son capaces de donar hidrógeno reduciendo al radical libre DPPH con valores de CD50  de 50 y 80 µg.ml-1 . Figura 1.- Actividad depuradora de la PII aislada de tubérculo de papa sobre el anión superóxido usando el sistema Xanthina/azul de tetrazolium/ Xantina oxidasa . Figura 1.- Actividad depuradora del radical libre hidroxilo usando el sistema deoxiribosa/ FeCl3/  EDTA/ ácido ascór-bico/ H2O2 por  la PII aislada de frutos de tomate de árbol. Conclusiones Las proteínas inhibidoras de glicosidasas aisladas de frutos de tomate de árbol y de papa se comportan como proteínas antioxidantes in vitro, depurando efectivamente los iones superóxido, hidroxilo y el radical DPPH. Estos resultados indicarían la probable participación de estas proteínas como moléculas de defensa contra el daño oxidativa en especies como Cyphomandra betacea y Solanum tuberosum y nos permiten sugerir la potencial utilización de estas proteínas en agricultura controlando el desarrollo de fitopatógenos y en la industria alimenticia como conservante  de frutos o tubérculos después de  la cosecha. Hasta el presente se ha informado que algunas proteínas de trigo e inhibidores de tripsina aislados de  Ipomoea batatas (Hou et al., 2001; Tong et al., 2000) presentan actividad antioxidante. Referencias bibliográficas Ordóñez, R., et al (2000). J. Enz. Inh.15:583-596. Isla, M.I. et al.  (2002)  J. Enz. Inh.17:17-43. Hou, W. et al. (2001) J. Agric. Food Chem. 49: 2978-2981. Tong, L. et al. (2000) J. Agric. Food Chem. 48: 1473-1478. Introducción En trabajos previos, aislamos y purificamos a partir de frutos maduros de Cyphomandra betacea (tomate de árbol) y de tubérculos de Solanum tuberosum proteínas inhibidoras de la actividad de invertásas ácidas solubles (PII) y demostramos que estos polipéptidos actúan como inhibidores de enzimas hidrolíticas producidas por hongos y bacterias fitopatógenicas y presentan  actividad inhibitoria del crecimiento bacteriano (Isla et al, 2002). Por ello propusimos su participación en los mecanismos de defensa de las plantas.  La oxidación de los ácidos grasos insaturados en las membranas biológicas lleva a la formación y propagación de radicales lipídicos, captación de oxigeno, reordenamiento de doble ligaduras en lípidos insaturados y la eventual destrucción de lípidos de membrana. El anión superóxido y el radical libre hidroxilo participan activamente en la iniciación de la peroxidación de lípidos. Los productos de oxidación de los lípidos pueden reaccionar a su vez con las  proteínas y producir su oxidación. El objetivo de este trabajo fue evaluar la capacidad antioxidante total y la capacidad depuradora de radicales libres de las PII aisladas y purificadas de frutos de tomate de árbol y de tubérculos de papa. Metodología A partir de frutos maduros (95 días después de la antesis) de tomate de árbol y de tubérculos de papa se aisló y purificó una PII de acuerdo a lo descripto por Ordóñez et al., 2000; Isla et al., 2002.   Se evaluó la capacidad depuradora del radical libre DPPH (difenilpicrilhidrazil),anión superóxido (Xantina/xantina oxidasa/azul de tetrazolium/EDTA), radical libre hidroxilo (deoxiribosa/FeCl3/  EDTA/ áci-do ascórbico / H2O2) y peróxido de hidrógeno. Se comparó la actividad de las proteínas frente a antioxidantes sintéticos (hidroxitolueno butilado) y naturales (ácido ascórbico y quercetina). Resultados y Discusión Las PII aisladas de tomate de árbol y de tubérculos de papa se comportaron como  depuradores de los radicales libres superóxido e hidroxilo. La actividad depu-radora fue dosis dependiente siendo más efectiva sobre el radical hidroxilo que sobre el radical superóxido (Fig. 1 y 2). La concentración necesaria para depurar el 50% de los radicales (CD50) fue de 30-60 µg.ml-1 para la PII aislada de tomate de árbol y de 80-100 µg.ml-1 para la PII aislada de tubérculos de papa. Ninguna de las PII mostró actividad prooxidante y ambas se comportaron como débiles depuradoras de peróxido de hidrógeno. Actuaron como antioxidantes primarios ya que son capaces de donar hidrógeno reduciendo al radical libre DPPH con valores de CD50  de 50 y 80 µg.ml-1 . Figura 1.- Actividad depuradora de la PII aislada de tubérculo de papa sobre el anión superóxido usando el sistema Xanthina/azul de tetrazolium/ Xantina oxidasa . Figura 1.- Actividad depuradora del radical libre hidroxilo usando el sistema deoxiribosa/ FeCl3/  EDTA/ ácido ascór-bico/ H2O2 por  la PII aislada de frutos de tomate de árbol. Conclusiones Las proteínas inhibidoras de glicosidasas aisladas de frutos de tomate de árbol y de papa se comportan como proteínas antioxidantes in vitro, depurando efectivamente los iones superóxido, hidroxilo y el radical DPPH. Estos resultados indicarían la probable participación de estas proteínas como moléculas de defensa contra el daño oxidativa en especies como Cyphomandra betacea y Solanum tuberosum y nos permiten sugerir la potencial utilización de estas proteínas en agricultura controlando el desarrollo de fitopatógenos y en la industria alimenticia como conservante  de frutos o tubérculos después de  la cosecha. Hasta el presente se ha informado que algunas proteínas de trigo e inhibidores de tripsina aislados de  Ipomoea batatas (Hou et al., 2001; Tong et al., 2000) presentan actividad antioxidante. Referencias bibliográficas Ordóñez, R., et al (2000). J. Enz. Inh.15:583-596. Isla, M.I. et al.  (2002)  J. Enz. Inh.17:17-43. Hou, W. et al. (2001) J. Agric. Food Chem. 49: 2978-2981. Tong, L. et al. (2000) J. Agric. Food Chem. 48: 1473-1478.