INVESTIGADORES
ETCHEVERRIA Analia Ines
congresos y reuniones científicas
Título:
Biotecnología aplicada a la Salud Pública y Sanidad Animal
Autor/es:
PARMA, ALBERTO E.; BOWDEN, RAÚL A.; SANZ, MARCELO, E; LUCCHESI, PAULA M.A.; VIÑAS, MARÍA R.; ESTEIN, SILVIA M.; PADOLA, NORA L.; ETCHEVERRÍA, ANALÍA I.; ARROYO, GUILLERMO H.
Lugar:
Olavarría- Buenos Aires-Argentina
Reunión:
Jornada; Encuentro de Investigadores de la Universidad Nacional del Centro de la provincia de Buenos Aires. Jornadas Universidad Abierta; 1998
Institución organizadora:
Secretaría de Ciencia y Técnica y Secretaría de Bienestar y Extensión de la UNCPBA
Resumen:
Resumen: OBJETIVOS Aplicación de la Biología Molecular a tres enfermedades infecciosas de interés en salud pública y sanidad animal: brucelosis, leptospirosis y diarrea hemorrágica. Los objetivos particulares de cada línea son: (1) Clonado e identificación de antígenos de Leptospira comprometidos en la patogénesis de la uveítis recurrente del equino con leptospirosis. (2) Identificación de los factores de virulencia de Escherichia coli causante de diarrea hamorrágica en el humano e identificación de reservorios en eslabones de la cadena  de elaboración de alimentos. (3) Caracterización de antígenos de membrana de Brucella candidatos a la elaboración de vacunas subcelulares.METODOLOGÍA Electroforesis en geles de poliacrilamida con SDS y Western blot: mediante esta técnica se estudiaron homogenatos de Leptospira interrogans y córnea equina a los fines de localizar las fracciones proteicas comprometidas en la relación antigénica entre ambos y que fuera hallada en este laboratorio previamente. También se analizaron antígenos de Brucella spp, producidos en una E. coli recombinante y se estudió su reconocimiento pos anticuerpos monoclonales y sueros de ovinos enfermos de brucelosis.Construcción de una biblioteca genómica de Leptospira y selección de clones: el ADN de L. interrogans serovariedad pomona fue digerido por la enzima de restricción EcoRI e insertado en le ADN del fago lamba gt11. Luego del empaquetamiento de infectó E. coli Y1090 e Y1089, a partir de las cuales se seleccionaron y analizaron los clones con anticuerpos anti-córnea equina.Reacción en cadena de la polimerasa: esta metodología se empleó en el estudio genético de las cepas de Escherichia coli aisladas de heces de bovinos y alimento cárneos. También, se usó para el estudio de los clones de ADN de leptospira. El aislamiento e identificación de las bacterias y la extracción de su ADN fue descripto en trabajos previos.Prueba de inmunoprotección en ratones BALB/c: se utilizó para conocer la actividad protectora de anticuerpos monoclonales anti-Brucella y de los antígenos recombinantes de Brucella elaborados por E. coli.RESULTADOS Y CONCLUSIONES En la línea de identificación de los factores de virulencia de E. coli verotoxigénica en materia fecal de animales, se comprobó la existencia de reservorios de cepas enterohemorrágicas en el ganado bovino, siendo de mayor riesgo la población de animales jóvenes, de acuerdo al genotipo de las cepas aisladas de ellos. E. coli verotoxigénica también fue hallada en alimentos cárneos tales como hamburguesas, carne picada y salchichas. Debido a que estas bacterias han sido descriptas como productoras de síndrome urémico hemolítico en la población infantil, su hallazgo en bovinos y alimentos permite definir algunos puntos de la cadena epidemiológica. Sin embargo, respetando las normas de faena del ganado y cocinando adecuadamente los alimentos cárneos, se evita su acción patogénica. Cabe destacar que éste es el primer trabajo que estudia la prevalencia de esta bacteria en el bovino en Argentina y ha asociado los serotipos existentes en el ganado y alimentos cárneos derivados.La línea de trabajo sobre la uveítis recurrente del equino con leptospirosis ha permitido establecer la localización de la proteína de la leptospira que comparte epitopes con córnea equina y por medio del clonado molecular de ADN pudo confirmarse la hipótesis de la antigenicidad cruzada. Esto establece que la relación antigénica entre estas proteínas desempeña un rol importante en la patogénesis de la uveítis del caballo enfermo con leptospirosis. Actualmente se trata de aplicar los clones obtenidos en estudios que permitan vincular el estado de uveítis en el caballo con la presencia de anticuerpos específicos en sangre.En brucelosis se han identificado epitopes en la membrana externa de B. ovis que son blanco de anticuerpos protectores. Además, al menos dos proteínas recombinantes han mostrado conferir protección parcial al ratón contra la infección por B. ovis. Los ensayos continúan con vistas a diseñar una vacuna subcelular