INVESTIGADORES
ETCHEVERRIA Analia Ines
congresos y reuniones científicas
Título:
FORMACIÓN DE BIOFILM Y EXPRESIÓN DE CURLI EN AISLAMIENTOS VTEC O157:H7 y O145:H-.
Autor/es:
CÁCERES, MARÍA EMILIA; ETCHEVERRÍA, ANALÍA I.; PADOLA, NORA L.
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología. II Congreso Microbiología Agrícola y Ambiental; 2013
Institución organizadora:
Asociación Argentina de Microbiología
Resumen:
Introducción y Objetivo: Los serotipos VTEC O157:H7 y O145:H- se han aislado de humanos y bovinos de Argentina, representando un serio problema para la salud pública. Debido a que los biofilm permiten a los microorganismos sobrevivir en un ambiente hostil, escapando muchas veces a los diagnósticos de rutina, nos propusimos estudiar la capacidad de formar biofilm y de expresar la fimbria curli en 3 aislamientos O157:H7 y 4 aislamientos O145:H- de origen bovino, pertenecientes al cepario del Laboratorio de Inmunoquímica y Biotecnología FCV, UNCPBA y en la cepa de referencia EDL933. Materiales y Métodos: Todos los aislamientos utilizados en este ensayo poseen los genes csgA, csgD y crl, pertenecientes al operón de curli. Cada aislamiento se ajustó a una concentración de 5x107 UFC/ml previa determinación de la DO600 y se sembró en microplacas de poliestireno de 96 pocillos. Se incubaron a 37 ºC y a 20±2 ºC 48 h y posteriormente se fijó con metanol durante 15 min. Las micoplacas se tiñeron con Cristal Violeta al 0,1% 20 min a temperatura ambiente. Se eluyó el colorante adherido a los biofilm con alcohol etílico 95% durante 15 min a 150 rpm y se realizó la lectura de la densidad óptica mediante lector ELISA a 570nm. De acuerdo a la DO determinada, los aislamientos se clasificaron como: NFB (no formador de biofilm), DFB (débil formador de biofilm), MFB (moderado formador de biofilm) y FFB (fuerte formador de biofilm). Para el análisis de la expresión de curli se sembró una ansada de cada aislamiento por agotamiento en placas de Agar Rojo Congo y se incubaron a 37 ºC y a 20 ºC 48 h. La lectura se realizó teniendo en cuenta la morfología de las colonias: red and rough (rdar) y soft and red (sar) como expresión de curli positivas, y soft and white (saw) como expresión de curli negativas. Resultados: De los 4 aislamientos O145:H- , 3 expresaron la fimbria curli (rdar) a 37 ºC, y resultaron NFB a dicha temperatura. El restante presentó una morfología sar y fue categorizado como DFB. De los 3 aislamientos O157:H7 de origen bovino, 2 expresaron curli (sar) y sólo uno de ellos fue clasificado como DFB; el restante presentó una morfología rdar y resultó NFB a 37ºC. La cepa EDL933 presentó una morfología de colonia sar pero no formó biofilm a dicha temperatura. A 20ºC ningún aislamiento expresó curli (saw); sólo un aislamiento O145:H resultó DFB a dicha temperatura y los restantes fueron NFB. Conclusiones: Los aislamientos VTEC O157:H7 y O145:H- no mostraron diferencias significativas en la formación de biofilm en placas de poliestireno y en la expresión de curli a las dos temperaturas estudiadas. Es destacable mencionar que la capacidad de desarrollar biofilm trasciende la influencia de la temperatura y la capacidad de expresar la fimbria curli de cada aislamiento, aunque todos ellos poseyeran el operón que codifica dicha fimbria.