Factores de Virulencia asociados a Escherichia coli productor de toxina Shiga

AGEL VILLEGAS, NATALIA; POLIFRONI, ROSANA; ETCHEVERRÍA, ANALÍA I.; PADOLA, NORA L.; PARMA, ALBERTO E.; ALBESA, I; BECERRA, M.C.; PARAJE, M.G.

Ciudad de Buenos Aires. Argentina

Congreso; XII Congreso Argentino de Microbiología. VI Congreso de la Sociedad Argentina de Bacteriología, Micología y Parasitología clínica (SADEBAC). I Congreso de Microbiología Agrícola y ambiental (DIMAyA); 2010

Asociación Argentina de Microbiología

IntroducciónEscherichia coli productor de toxina Shiga (STEC) se asocia a brotes de diarrea, colitishemorrágica y síndrome urémico hemolítico (SUH). La patogenicidad está asociadacon varios factores de virulencia, entre los que se incluyen la producción de la toxinaShiga (vt1, vt2). Las cepas más virulentas de STEC además poseen otros comoenterohemolisina (ehxA) e intimina (eae). Un nuevo factor de virulencia podría ser lacapacidad que poseen las STEC para formar biofilms, lo cual se encuentra menoscaracterizado. Entre los factores importantes para la formación del biofilms se puedenmencionar a la fimbria tipo I ?curlina?.ObjetivoDeterminar genotípica y fenotípicamente la presencia de distintos factores de virulenciaen cepas productoras de toxina Shiga aislada de pacientes con SUH.Materiales y MétodosEn este estudio se analizaron ocho cepas clínicas (siete E.coli O157:H7 y una O111:H-)provistas por Hospitales pediátricos de Córdoba y una cepa de referencia (EDL 933).Análisis Genotípico: La presencia de los genes que codifican para los factores devirulencia (vt1, vt2, ehxA, eae) y para la proteína curlina (csgD, csgA y crl) seestudiaron mediante la reacción en cadena de la polimerasa (PCR).Análisis Fenotípico: Mediante un Inmunoensayo óptico (OIA SHIGATOX) se estudió laexpresión de las toxinas Shiga 1 y/o 2.La expresión de la curlina se analizó mediante Rojo Congo.La capacidad de formar biofilms de las cepas de E.coli se determinó mediante laadhesión a placas de poliestireno de 96 wells y su posterior coloración con cristalvioleta determinando la densidad óptica a 595 nm.ResultadosMediante el análisis genotípico se observó la presencia de los genes vt1, vt2, ehxA,eae, csgD, csgA y crl en todas las cepas estudiadas, excepto en la E.coli O111 que nopresentó el gen vt2 que codifica para la toxina Shiga 2.En cuanto al análisis fenotípico, todas las cepas expresaron ambas toxinas en elsobrenadante de cultivo, excepto E.coli O111 (solo Shiga 1). Cuando se realizó ladeterminación de curlina se apreció el desarrollo de colonias lisas y rosadas,interpretándose este resultado como negativo.Todas las cepas estudiadas fueron débiles formadoras de biofilms, presentando valoresentre 0,15 y 0,25 de densidad óptica.ConclusionesLas cepas regionales aisladas de pacientes con SUH presentaron la co-expresión dediversos factores de virulencia, tanto genotípica como fenotípicamente.En cuanto a la capacidad de las cepas de formar biofilms, si bien se observó lapresencia de los genes que codifican para la fimbria tipo I, no se obtuvieron lascaracterísticas colonias negras indicativas de la expresión de la proteína. Asociado a loantes mencionado, todas las cepas en estudio mostraron una débil formación debiofilms in vitro lo que parece indicar que los genes que codifican la formaciónnecesitan condiciones in vitro no requeridas para que otros factores de virulencia seexpresen.