DETECCIÓN Y CARACTERIZACIÓN DE LA CAPACIDAD DE FORMAR BIOFILM DE CEPAS MEDIAMBIENTALES DE VTEC

POLIFRONI, ROSANA; ARROYO, GUILLERMO H.; ETCHEVERRÍA, ANALÍA I.; PADOLA, NORA L.

La Plata

Otro; Reunión Interdiciplinaria de Biofilms de la Provincia de Buenos Aires; 2012

INIFTA ? CONICET- UNLP.

La colonización bacteriana y la supervivencia en diferentes nichos ecológicos con frecuencia involucran la formación de biofilms sobre superficies abióticas. Estas comunidades pueden servir como fuentes de contaminación y favorecer la supervivencia de patógenos en el medioambiente. En este sentido, se sabe que uno de los componentes de la matríz extracelular del biofilm de Escherichia coli es la fimbria curli y se expresa bajo condiciones estresantes como son las bajas temperaturas, baja osmolaridad y crecimiento estacionario. La información genética para la síntesis de curli se encuentra codificada en los operones csgABD y csgEFGH del cromosoma  bacteriano. El objetivo de este trabajo fue determinar la capacidad potencial de formar biofilms de 12 cepas de Escherichia coli verotoxigénicas (VTEC) aisladas del medioambiente de un tambo (bebederos, comederos y suelo), por medio de la detección de los genes implicados en la expresión de la fimbria curli (csgA, csgD y crl) a través de tres PCR monoplex desarrolladas en nuestro laboratorio; la caracterización fenotípica mediante cultivo en agar Rojo Congo (RC) a 28°C durante 48 h y la cuantificación de la biomasa del biofilm formado durante 48 h a 28°C sobre placas de poliestireno de 96 pocillos utilizando cristal violeta al 0,1% y medición de la DO a 570 nm. Las cepas se clasificaron según su capacidad de formar biofilm en las siguientes categorías: no formadoras de biofilm, débil, moderada y gran productora de biofilm según la escala propuesta por Stepanovic et al. (2000). Todas las cepas analizadas en este trabajo presentaron los tres genes necesarios para la expresión de curli (csgA, csgD y crl). Esto implicaría que todas las cepas comparten la misma la capacidad potencial de expresar la fimbria. Sin embargo, la expresión de la fimbria en placas de agar RC no fue homogénea: el 33% presentó un fenotipo rojo y rugoso (rdar), el 41% blanco y liso (saw) y el 25% restante fue rosa y liso (sar). La única cepa O157:NM(H7) de este estudio mostró un fenotipo rdar a diferencia de lo informado en numerosos trabajos. Este resultado al igual que la presencia de cepas con el fenotipo sar puede deberse la activación de un mecanismo de adaptación llamado fase variable, donde la expresión de genes o la producción de proteínas se ve alterada debido a un cambio aleatorio y reversible en secuencias cortas del ADN. El 25% de las cepas analizadas que presentaron los fenotipos rdar y sar, también demostraron poseer la capacidad de formar biofilm. El 16% de las cepas analizadas presentó una débil capacidad de formar biofilm (DFB) y el 9%, moderada capacidad de formar biofilm (MFB), lo que nos permite suponer la presencia de otros factores que intervendrían en la capacidad de formar biofilm en las cepas analizadas. Tampoco se encontraron diferencias significativas entre los orígenes. Entonces, la capacidad de formar biofilm dependería tanto la información genética que posea la bacteria como del ecosistema que la rodea para desencadenar la expresión  de los genes necesarios para la formación de comunidades sésiles