El ADP: un novedoso modulador del volumen celular en células de hepatoma humano Huh-7

ESPELT M.V; ALVAREZ C.L.; DE TEZANOS PINTO F; SCHWARZBAUM, PJ

Rosario

Congreso; Anual de la Sociedad Argentina de Fisiología; 2012

Sociedad Argentina de Fisiología

La exposición de células hepáticas y de hepatoma a medios hipotónicos, induce el aumento del volumen celular seguido de la pérdida de iones y agua. Esto provoca la disminución regulatoria del volumen celular (RVD) que tiende a restaurar los valores de volumen a niveles control. En varios sistemas celulares el RVD puede ser modulado por la interacción entre nucleótidos extracelulares con receptores purinérgicos P2 y con enzimas de superficie llamadas eNTPDasas El objetivo del presente trabajo es estudiar la variación de volumen en células Huh-7 incubadas en medio hipotónico (Hypo), y el rol del ATP y/o ADP extracelulares en el RVD. La exposición de las células a Hypo generó salida de ATP y aumento del volumen celular seguido de RVD de 40.8±7.80 % a los 40 min (RVD40). En Hypo con apirasa, una enzima que remueve el ATP y el ADP extracelulares, el RVD fue similar al observado en Hypo solo (RVD40api=42.2±9.71 %) indicando que el ATP extracelular (ATPe) no mediaría el RVD. Sin embargo, en presencia de Hypo+Cibacron Blue+Suramina (inhibidores de receptores P), se inhibió el RVD sugiriendo un posible papel de los nucleótidos extracelulares en la respuesta. Las células incubadas en Hypo+Na+/K+ ATPasa (enzima que cataliza la conversión de ATP a ADP) mostraron una regulación completa de volumen (RVD40=106.1±14.31%), sugiriendo un posible rol del ADPe sobre el RVD. Resultados similares se observaron al agregar el agonista de ADP, 2-Metil tio ADP, mientras que un inhibidor del receptor P2Y13 revirtió esta activación. Experimentos de RT-PCR mostraron la presencia de mRNA para el receptor P2Y13 y para eNTPDasa 2 (enzima que principalmente hidroliza ATP a ADP). Por otro lado, en medio hipotónico la concentración de ATPe aumentó 2.4 veces y la de ADPe 39 veces sobre el valor isotónico basal. Tanto la Brefeldina A (inhibidor de la exocitosis) como el carbenoxolone (inhibidor de Panexina1) inhibieron parcialmente la salida de ATP. Los resultados muestran por primera vez al ADP extracelular como molécula activadora del RVD a través de su interacción con el receptor P2Y13. En cuanto al origen del ADPe, se postula que el medio hipotónico induciría la salida de ATP por al menos dos vías, y que el ATPe resultante podría ser convertido a ADPe por medio de la eNTPDasa 2.