EFECTO DEL ATP EXTRACELULAR EN CELULAS DE HEPATOMA HUMANO.

ESPELT MV; SANCHEZ ALBERTI G; DE TEZANOS PINTO F; SCHWARZBAUM PJ

Mar del Plata

Congreso; LIV Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2009

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

El ATP extracelular cumple un papel importante en la cascada de señalización celular, pero los mecanismos que contribuyen a la acumulación extracelular del nucleótido son poco conocidos. En células animales distintos estímulos generan la liberación no lítica de ATP al medio extracelular, generando en algunos casos un aumento en la concentración de Ca2+i. El objetivo del trabajo es estudiar la cinética de ATPe y de Ca2+i de células de hepatoma humano (HepG2).Se utilizaron dos estímulos: la deformación de la membrana plasmática (por medio de agitación) y la incubación con distintas concentraciones de ATP exógeno (ATPe). El ATPe se cuantificó de manera continua utilizando la técnica de luciferina-luciferasa. La agitación indujo un aumento de ATPe hasta un máximo (78.7±28.85 nM, n=7) seguido de una caída exponencial hacia valores control. Una cinética similar se observó en presencia de distintas concentraciones de ATP exógeno, donde concentraciones de 50, 100 y 200 nM generaron máximos de 43.1±3.05 nM (n=6), 135.0±19.25 nM (n=7) y 269.0 ±26.78 nM (n=7), respectivamente. Es decir que el ATP máximo representa un 86.2% (50 nM), 135% (100 nM) y 134.5% (200 nM) de la concentración de ATP exógena agregada. Utilizando microscopía de fluorescencia para determinar Ca2+i se registró el porcentaje de células que presentaron al menos un pico (frecuencia de spikes). Observamos que la frecuencia de spikes aumenta hiperbólicamentecon la concentración de ATP exógeno, con una K0.5=3.8 uM. En ausencia de estimulación mecánica, la frecuencia fue de 12±3 %, mientras que luego de la agitación aumentó a 21±4% (n=6, p<0.05). De los resultados se concluye que en células HepG2 tanto el ATP exógeno como la agitación mecánica promueven la liberación no lítica de ATP y el aumento de la frecuencia de spikes. Es decir ATPe y Ca2+i podrían formar parte de un bucle donde ATPe podría activar la señalización por Ca2+i, y esta activación llevar a un aumento del eflujo de ATP.