. Evaluación del rol de la aquaporina-8 en el transporte transepitelial de agua en células hepáticas

M. VICTORIA ESPELT; L. SORIA; LAROCCA C; MARINELLI R

Mar del Plata, Buenos Aires, Argentina

Congreso; Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2008

Sociedad Argentina de Investigacion Clinica (SAIC)

Los hepatocitos expresan aquaporinas (AQPs) en forma polarizada.Nuestros trabajos previos indican que la expresión deAQP8 en la membrana canalicular de los hepatocitos secorrelaciona con la permeabilidad osmótica canalicular y la secreciónbiliar. Por el contrario, estudios en ratones aqp8 -/- sugierenque AQP8 no tendría relevancia en el transporte de aguacanalicular. Sin embargo, hasta el momento no existe un modeloque permita obtener evidencias concluyentes en uno u otro sentido.Nuestro objetivo fue desarrollar una metodología para evaluarel transporte transhepatocitario de agua en un modelo quepermita analizar el rol de la AQP8. Metodología y Resultados:Utilizando ARN de interferencia generamos células HepG2 (derivadasde hepatoma humano) con disminución en la expresión deAQP8 (AQP8-), que fue corroborada por inmunobloting (-70%,p<0,05) y microscopía confocal. Células controles y AQP8- fueronpre-cargadas durante 3 min con 5-clorometilfluoresceindiacetato, fluoróforo que, luego de ser metabolizado por las célulashepáticas, cambia su espectro de emisión de fluorescencia yes rápidamente transportado a las estructuras canaliculares. Estascélulas fueron expuestas a un gradiente hipo-osmótico de 200mOsm. La intensidad de fluorescencia fue registrada en áreas dedistintos canalículos y la pendiente de decaimiento de fluorescenciarelativa fue usada para calcular los cambios relativos en elvolumen canalicular (VCR). La disminución en la expresión deAQP8 inhibió significativamente el aumento del VCR en presenciadel gradiente osmótico (C: 1,28 ± 0,03; AQP8-: 1,09 ± 0,03,p<0,05). Estos Resultados fueron coherentes con Resultadosobtenidos en condiciones similares por la técnica tradicional deplanimetría, a la vez que mostraron mayor reproducibilidad. Conclusión:desarrollamos una metodología que permitió evaluar eltransporte transepitelial de agua en hepatocitos y obtener evidenciadefinitiva sobre el rol de AQP8 a nivel canalicular.