Optimización de modelos de cultivo in vitro para el estudio de desarrollo de E. granulosus

PRADA L; GUTIERREZ A; CUCHER M; SPILIOTIS M; BREHM K; ROSENZVIT M

Rosario, Argentina

Congreso; VIII Congreso Argentino de Protozoología y Enfermedades Parasitarias, Sociedad Argentina de Protozoología; 2008

BM. Optimización de modelos de cultivo in vitro para el estudio de desarrollo de E. granulosus Prada L1, Gutierrez A1, Cucher M1, Spiliotis M2, Brehm K2, Rosenzvit M1 1INEI, ANLIS “Dr. Carlos G. Malbrán”, 2Univ. de Würzburg, Alemania. El estudio de los parásitos helmintos no ha alcanzado el desarrollo logrado en los parásitos unicelulares, debido en parte a la complejidad de sus ciclos de vida, difíciles de reproducir en el laboratorio, y a la falta de modelos in vitro apropiados. E. granulosus es un parásito helminto que existe como un conjunto de cepas adaptadas a hospedadores intermediarios particulares. El estadío larval de metacestode (quiste hidatídico) causa la hidatidosis humana. E. granulosus presenta particularidades como la capacidad dual del protoescolex (estadío larval pre-adulto) de desarrollarse hacia microquiste o al estadío adulto estrobilar. El objetivo de este trabajo fue optimizar los modelos in vitro de E. granulosus para estudiar factores involucrados en el desarrollo y supervivencia de las distintas cepas de E. granulosus. Se extrajeron protoescólices (PE) de quistes porcinos, ovinos y bovinos. Se determinó la cepa mediante secuenciación de un fragmento del gen mitocondrial CO1 y  se cultivaron por duplicado en las siguientes condiciones: 1)líquido hidatídico, 2)DMEM con 10% de suero fetal bovino (DMEM/S), 3)DMEM/S con líneas celulares de hepatocitos 4)DMEM/S con líneas celulares de fibroblastos y 5)DMEM/S con insulina. Se analizó el efecto en el tiempo de supervivencia y velocidad de desarrollo. La condición que permitió mayor supervivencia fue el co-cultivo con hepatocitos. En esta condición se observaron en mayor número formas tendientes a estrobilización, así como también PE vesicularizados, habiéndose detectado capa laminar incipiente en cepa oveja. Esto permitiría la comparación de ambas formas de manera simultánea en cuanto a la expresión de transportadores de metabolitos, factores de crecimiento y sus receptores.