INVESTIGADORES
ROMANINI Diana
congresos y reuniones científicas
Título:
APLICACIONES BIOTECNOLÓGICAS DE LOS COMPLEJOS INOLUBLES POLIACRILATO - ALFA AMILASA.
Autor/es:
PORFIRI, MA. CECIIA; MELNICHUK, NATASHA; BRAIA, MAURICIO; ROMANINI, DIANA
Lugar:
Los Cocos
Reunión:
Simposio; XII Simposio Argentino de Polimeros; 2017
Institución organizadora:
LaMaP, IPQA, UNCordoba
Resumen:
Los polímeros iónicos suelen denominarse ?smart-polymers? (polímeros inteligentes) o ?polielectrolitos?. La formación de complejos entre proteínas y dichos polímeros permite formar complejos solubles los cuales pueden tornarse insolubles bajo ciertas condiciones del medio: fuerza iónica, pH, concentraciones relativas polímero/proteína, etc. [1]. La formación y disociación reversible de estos complejos tiene diversas aplicaciones bioteconológicas tales como: purificación, inmovilización y liberación controlada de proteínas, etc. [2-4]. La formación de complejos entre el poliacrilato y la alfa-amilasa producida por el hongo Aspergillus oryzae se investigó a través de diversas técnicas espectrofotométricas y calorimétricas. Se pusieron a punto las variables del medio que permitieron hallar las condiciones óptimas de formación del complejo insoluble alfa-amilasa-poliacrilato. Posteriormente, se evaluaron los efectos que el polímero induce sobre la estabilidad termodinámica y catalítica de la proteína.De acuerdo a los resultados, se observó que la calorimetría de titulación isotérmica reveló una interacción mixta (entálpica y entrópicamente conducida) que sigue un modelo de un único tipo de sitios equivalentes e independientes, donde un gran número de moléculas de proteína se unen por molécula de poliacrilato (n alfa-amilasa /n polímero =476; kaf =2.7 104 ± 2.103). Por dicroísmo circular se observó que alfa-amilasa pierde parte de su estructura secundaria en concentraciones crecientes de poliacrilato, mientras que es estabilizada a pH ácido. Por el contrario, los espectros de fluorescencia no se vieron afectados significativamente por la presencia del polímero. La calorimetría diferencial de barrido mostraron que los dos dominios de alfa-amilasa interactúan con los poliacrilatos, pero sólo uno se vio afectado en su estabilidad conformacional y que el proceso de desnaturalización térmica resultó parcialmente reversible.La precipitación de este complejo insoluble luego de adicionar una alícuota adecuada de poliacrilato sobre un cultivo fúngico logró recuperar con alta eficiencia alfa-amilasa en un único y simple paso de purificación u otras aplicaciones (88.4%).