Producción y aislamiento de celulasa de Aspergillus niger y Trichoderma sp en medio sólido. Análisis de la estabilidad enzimática frente a la temperatura y al pH.

BOGGIONE, MARIA JULIA; GIORDANO, MATIAS; RODRIGUEZ, FERNANDA; ROMANINI, DIANA; FARRUGGIA, BEATRIZ

Natal

Congreso; 27º Congresso Brasileiro de Microbiologia; 2013

Universidad de San Pablo

La celulasa es un complejo enzimático capaz de degradar celulosa. Son enzimas de importancia biotecnológica por sus aplicaciones en industrias, para la fermentación de biomasa en biocombustibles y en aplicaciones farmacéuticas así como en investigaciones biológicas. La necesidad de disponer de grandes cantidades de enzimas con alto grado de pureza ha impulsado el desarrollo de la bioseparación de proteínas. La producción en cultivos en medio sólido tiene como ventaja la posibilidad de utilizar desechos agroindustriales como fuentes de carbono. El objetivo es encontrar la temperatura óptima de trabajo y las mejores condiciones de estabilidad de una celulasa producida por Aspergillus niger y Trichoderma sp obtenida en cultivos en medio sólido usando desechos agroindustriales y aislarla a través de una precipitación con polielectrolitos. Para la determinación de la temperatura óptima se llevaron a cabo medidas de actividad enzimática a distintas temperaturas. Las condiciones óptimas obtenidas con la enzima fueron: un rango de temperatura óptima (50-65 ºC) a pH 5,3. Se determinó la estabilidad frente a temperatura y pH preincubando la enzima en un rango de 30 a 65°C y para un rango de pH entre 3 y 6, a diferentes tiempos. La celulasa presentó una mayor estabilidad a una temperatura de 50ºC y no se observaron diferencias importantes a los diferentes pHs y tiempos ensayados. El medio sólido para la producción de celulasa con Trichoderma sp con el que se obtuvieron mejores resultados fue la càscara de limón entre otros ensayados permitiendo extraer actividad celulasa. Se utilizó como fuente de partida para la precipitación con polivinil sulfonato de sodio (PVS), y chitosan (CHS) obteniéndose altos valores de purificación y bajos rendimientos. Se llevó a cabo la producción de celulasa a partir de una cepa NRRL3 de A. niger en medio sólido utilizando cáscara de soja como soporte de crecimiento y fuente de carbono. Sus características fueron 13,48 mg/mL de proteínas totales, 2,29 U/mL.min de actividad enzimática, pH 4,85. Sobre el caldo de cultivo se precipitó la celulasa con PVS y CHS: los rendimientos (R%) y factores de purificación (FP) en los precipitados fueron del orden del 30 R% y FP entre 7 y 8 aunque los R% en los sobrenadantes fueron mayores a 80% en ambos casos. Los medios sólidos que utilizan desechos industriales representan una ventaja de producción enzimática y la precipitación un adecuado primer paso separativo