AISLAMIENTO DE UNA MUCOR PEPSINA DESDE UN MEDIO DE CULTIVO APLICANDO PRECIPITACIÓN CON POLIELECTROLITOS.

RAVAGLIA, PAOLA; PERLO, LORENA; MARINI, ANALÍA; SPELZINI, DARÍO; ROMANINI, DIANA; FARRUGGIA, BEATRIZ

Rosario

Congreso; IX Congreso y XXVII Reunión anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2007

Sociedad de Biología de Rosario

AISLAMIENTO DE UNA MUCOR PEPSINA DESDE UN MEDIO DE CULTIVO APLICANDO PRECIPITACIÓN CON POLIELECTROLITOS. Paola Ravaglia, Lorena Perlo, Analía Marini, Darío Spelzini, Diana Romanini, y Beatriz Farruggia Área Fisicoquímica. Depto.Química Física. Facultad de Cs. Bioquímicas y Farmacéuticas. U.N.R. CIUNR y CONICET e-mail:  bfarrug@fbioyf.unr.edu.ar La mucor pepsina es una proteasa aspártica cuyo mecanismo incluye el corte del enlace  Phe-Met en la 6-caseína láctica, como paso inicial para coagulación de la leche en la producción de quesos. Entre otros medios naturales o producidos por ingeniería genética, los caldos de cultivo microbianos contienen las enzimas coagulasas solubles, desde donde es necesaria su purificación. Algunos polímeros de cadena flexible (PCF) con carga eléctrica neta, llamados polielectrolitos (PE), forman complejos que precipitan con ciertas proteínas. Controlando las condiciones del proceso como la densidad de carga eléctrica y  el peso molecular del PE, pH, presencia de aniones polivalentes, fuerza iónica, concentración del PE, mezcla de PEs de diferentes carga eléctrica , etc., es posible separarlas del resto de las proteínas de un medio natural complejo. Luego se deben encontrar las condiciones para la disociación del complejo PCF-proteína, la recuperación de la proteína con actividad biológica conveniente y el reciclado del PE para un nuevo proceso. El objetivo de este trabajo fue aislar una mucor pepsina desde un producto comercial proveniente de la liofilización de un caldo de cultivo del Mucor meihei utilizando polietilenimina como PCF. El estudio básico consistió en medir la turbidez del medio en función de las diferentes relaciones en masa de polímero/proteína. Se obtuvieron los perfiles de turbidez y actividad enzimática vs. el pH  para las mejores relaciones obtenidas. Se estudiaron tanto la actividad coagulasa (sobre leche) como la actividad proteolítica (sobre hemoglobina) de la enzima, en dichas condiciones. Los resultados indican que la máxima capacidad de precipitación se consigue con una relación de 0.6 mg de PEI/mg Mucor a un pH de 7.2. En estas condiciones se encontró además la máxima actividad coagulasa de la proteína. Se aplicaron estas condiciones de precipitación sobre el medio de cultivo y se obtuvo 6.5 veces más de actividad enzimática coagulasa en el precipitado que en el sobrenadante y 5 veces más de actividad proteolítica para una relación de proteínas totales en el precipitado respecto del sobrenadante de 0.7. Los resultados permiten concluir que esta metodología de extracción puede ser aplicada para aislar y purificar estas proteínas de los productos naturales.