FORMACIÓN DE COMPLEJOS INSOLUBLES ENTRE TRIPSINA Y POLIACRILATO. SU APLICACIÓN A LA BIOSEPARACIÓN.

PORFIRI, MA. CECILIA; ROMANINI, DIANA; PICÓ, GUILLERMO

Rosario

Congreso; IX Congreso - XXVII Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2007

Sociedad de Biología de Rosario

La tripsina es una proteasa de alto valor comercial. Se la utiliza en una amplia variedad de procesos industriales. Puede obtenerse a partir de páncreas bovino y porcino, los cuales son desechos de la industria frigorífica.             Los polímeros de cadena flexible que poseen carga eléctrica neta, denominados comúnmente polielectrolitos (PE), forman complejos con  proteínas de carga opuesta. Dichos complejos pueden volverse insolubles y separarse del medio por simple decantación. Este proceso depende de una serie de variables experimentales tales como: diferente densidad de carga eléctrica, temperatura, peso molecular del PE, pH, fuerza iónica, relación molar proteína/PE, etc. Cuando una proteína forma parte de una mezcla compleja en un producto natural, la precipitación con un polielectrolito puede lograr separarla del resto. Esta es la base de una estrategia de aislamiento de una proteína de interés.             El objetivo de este trabajo fue diseñar un método para purificar tripsina utilizando poliacrilato, un PE aniónico, a partir de su fuente natural. Para determinar las variables del medio que condicionan la formación del complejo poliacrilato-tripsina se utilizaron técnicas especrofotométricas (turbidez a 420nm) y calorimetría de titulación isotérmica. Se ensayaron diferentes variables del medio que condicionan el proceso de precipitación y se observó que la máxima turbidez a 20ºC se obtiene a pH 3, con una relación estequiométrica proteína-polímero de 143:1 y en ausencia de sales en el medio. La curva de calorimetría de titulación isotérmica mostró que la proteína se fija al polímero siguiendo un modelo de un único tipo de sitios con DH negativo, acorde con una interacción electrostática entre polímero y proteína. La  actividad enzimática de tripsina en presencia del polímero se redujo sólo en un 16% respecto a la determinada para la proteína en buffer fosfato. La enzima no produjo variación significativa de su actividad a lo largo de 24hs, lo que implica que la enzima es estable cuando está formando parte del complejo con el poliacrilato. Los resultados obtenidos permitieron conocer las condiciones adecuadas del medio y las características de los complejos insolubles para poder ser aplicados a la bioseparación de tripsina u otras proteínas de similares características a partir de su fuente natural.