ESTUDIO DE LA ESTABILIDAD TERMODINÁMICA DE LA ALBÚMINA UTILIZANDO ANFOTERICINA B COMO SONDA ÓPTICA

ROMANINI, DIANA; MÚLLER, GABRIELA; PICO, GUILLERMO

Rosario

Congreso; XXI Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2001

Sociedad de Biología de Rosario

El antibiótico poliénico Anfotericina B (AmB) es un macrólido insaturado  de naturaleza anfipática, que  es usualmente empleado en la terapéutica de infecciones fúngicas sistémicas ;poseen un alto número de dobles enlaces conjugados, lo que le confiere una gran riqueza en cuanto a sus propiedades espectroscópicas. El objetivo de nuestro trabajo fue estudiar la posibilidad de emplear el cromóforo AmB como sonda óptica para detectar cambios conformacionales en la Albúmina Sérica Humana (HSA)  inducidos por agentes desnaturalizantes, temperatura, pH y por la unión de distintos ligandos  a esta  proteína. La unión de AmB a la HSA se siguió mediante medidas del espectro de absorción, y de emisión de fluorescencia del cromóforo.             Se obtuvieron las curvas de desnaturalización química de la HSA en presencia de urea, midiendo la  absorbancia y la fluorescencia de la AmB unida a la proteína. Se hallaron los calores de Cm y se compararon entre sí con las obtenidas a partir de la fluorescencia de la proteína nativa. Se obtuvieron las curvas de desnaturalización térmica de la HSA midiendo la absorbancia y la fluorescencia de la AmB unida a la proteína . Se estudió el cambio conformacional (N-B) de la HSA ntre pH 6-9 empleando AmB como sonda óptica y se compararon los resultados con los obtenidos utilizando como sonda óptica a bilirrubina. En ambos casos se calculó el pKa de transición. Se estudió la competición de distintos ligandos para el sitio de unión de AmB a la HSA, siguiendose el desplazamiento de AmB por u absorbancia a 408nm Competidores como Ibuprofeno (sitio I), Probenecid (sitio II) y ac linoleico (sitio de los acidos grasos) produjo un cambio conformacional en el entorno de AmB sin desplazar a la misma.             Se concluye que la AmB podrá ser empleada como sonda óptica para seguir cambios conformacionales en la HSA, ya que su espectro de absorbancia y de emisión de fluorescencia mostró ser muy sensible a cambios en el entorno donde se encuentra unida la AmB a la proteína.