PÉPTIDOS ANTITROMBÓTICOS IDENTIFICADOS EN PROTEÍNAS DE AMARANTO SOMETIDAS A DIGESTIÓN GASTROINTESTINAL SIMULADA

ANA CLARA SABBIONE; AGUSTINA NARDO; ADRIANA ALICIA SCILINGO; MARÍA CRISTINA AÑÓN

Montevideo

Congreso; INNOVA CIBIA 2015; 2015

Laboratorio Tecnológico del Uruguay (LATU)

Los alimentos funcionales han cobrado gran importancia buscando prevenir enfermedades prevalentes en el mundo. Para encontrar ingredientes biológicamente activos que integren nuevos alimentos funcionales se decidió explorar la actividad antitrombótica de proteínas de semillas de amaranto. Se preparó un aislado proteico con harina desgrasada de semillas de Amaranthus hypochondriacus (extracción pH 9, precipitación isoeléctrica pH 5). El aislado se sometió a digestión gastrointestinal simulada tratándolo inicialmente con pepsina (0,1g pepsina/g proteína, pH 2, 37°C, 1 hora), y luego con pancreatina (0,1g pancreatina/g proteína, pH 6, 37°C, 1 hora). Empleando el método de microplacas se determinó la actividad antitrombótica in vitro del aislado y del digerido. Los resultados mostraron que en las proteínas de amaranto se encuentran péptidos con actividad antitrombótica que se liberan por digestión gastrointestinal simulada (IC50=0,23±0,02 mg/ml) mientras que el aislado no inhibió la coagulación a las concentraciones estudiadas.Mediante FPLC de exclusión molecular se obtuvo a partir del digerido una fracción activa (FA, IC50=0,07±0,01 mg/ml) con comportamiento dosis-dependiente. Se realizaron pruebas de absorción de la FA a través del epitelio intestinal in vitro, estudiando la actividad transportadora de una monocapa de células epiteliales Caco 2-TC7 ubicada en insertos. Por RP-HPLC se analizaron los contenidos de la cámara apical (CA) y basolateral (CB) del inserto, encontrándose tres picos en los cromatogramas del contenido de CB correspondientes a compuestos capaces de atravesar la monocapa celular. Por espectrometría MALDI-TOF de FA y CB se identificaron péptidos provenientes de globulina 11S y lectina de amaranto. Considerando las características de los sustratos fisiológicos de la trombina se seleccionaron aquellos péptidos que presentaron mayor potencial de interacción con la enzima, junto con aquellos identificados capaces de atravesar la monocapa celular. Las secuencias seleccionadas se ubicaron en las estructuras de globulina 11S y lectina con el objeto de analizar la accesibilidad de las proteasas.