Empleo de pruebas globales de hemostasia para evaluar la potencial actividad antitrombótica de fracciones proteicas de semillas de amaranto y sus hidrolizados

ANA CLARA SABBIONE; MARIANA MARTA GONZÁLEZ; ADRIANA ALICIA SCILINGO; MARÍA CRISTINA AÑÓN

Capital Federal

Jornada; VI Jornadas Internacionales de Proteínas y Coloides Alimentarios; 2011

Universidad de Buenos Aires

Existe una importante relación entre la alimentación y muchas de las enfermedades prevalentes en el mundo. Una dieta saludable combinada con la ingesta de alimentos funcionales puede contribuir a minimizar el padecimiento de las mismas. Tal concepto invita a explorar propiedades biológicas de interés para la salud en diversas fuentes alimentarias, siendo las proteínas provenientes de las semillas de amaranto una excelente opción, dado que cuentan con un completo perfil aminoacídico, un elevado contenido de lisina, que su cultivo presenta ciertas ventajas agronómicas y que se han encontrado bioactividades en péptidos que las componen. Este trabajo se focalizará en el estudio de la actividad antitrombótica de las fracciones proteicas presentes en las semillas de amaranto y sus hidrolizados. Se utilizaron semillas de Amaranthus mantegazzianus (INTA-Alguil, La Pampa, Argentina). El aislado y las fracciones proteicas se prepararon a partir de la harina desgrasada con hexano según los protocolos de extracción de Martínez y col., 1996 y Konishi y col., 1991 respectivamente. Los hidrolizados proteicos se obtuvieron empleando alcalasa (1,71U Anson/g sólido; 0,08 µl/mg de aislado, 20 min, 37ºC) y luego tripsina (10600 U BAEE/mg sólido; 0,01 mg/mg de aislado, 20 min, 37ºC). La reacción de ambas enzimas se detuvo calentando la mezcla de reacción (85ºC, 10 min). Las muestras se caracterizaron mediante la determinación de la concentración proteica (Kjeldahl), del grado de hidrólisis (método del TNBS) y la realización de electroforesis Tricina-SDS-PAGE con y sin agente reductor, de cromatografía de exclusión molecular y de calorimetría diferencial de barrido.Las pruebas globales de hemostasia empleadas fueron: tiempo de protrombina (TP), tiempo de tromboplastina parcial activado (APTT) y tiempo de trombina (TT). Las tres pruebas se utilizan como técnicas globales de screening de alteraciones en el sistema de coagulación de los pacientes. Valores prolongados de estas pruebas pueden indicar estados de hipocoagulabilidad o presencia de inhibidores, de modo que trabajando con un plasma normal control y el mismo en contacto con los péptidos de interés se puede detectar si las distintas fracciones estudiadas producen algún cambio en la formación del coágulo.Los resultados obtenidos mostraron que algunas fracciones proteicas y sus hidrolizados producen un aumento de los tiempos de TP, APTT y TT respecto al plasma control en las pruebas globales de hemostasia, observándose el máximo retardo al utilizar la fracción glutelinas sin hidrolizar, lo cual podría indicar que dicha fracción contiene algún péptido que presenta actividad antitrombótica. Estos resultados se correlacionan con los obtenidos empleando la técnica in vitro de las microplacas (Yang y col., 2006; Zhang y col., 2007).