Inhibición de Salmonella enterica in vitro en presencia de bacterias lácticas

ANA MORETTI; ÁNGELA LEÓN PELÁEZ; GOLOWCZYC, MARINA A.

Buenos Aires

Congreso; II Congreso Internacional de Zoonosis IX Congreso Argentino de Zoonosis; 2018

INTRODUCCIÓN: El uso de antibióticos promotores de crecimiento en producción aviar es controversial por el desarrollo de patógenos resistentes, el efecto residual en alimentos y los desequilibrios de la microbiota intestinal. Los probióticos con actividad antimicrobiana son una alternativa a los antibióticos. Objetivo del trabajo: evaluar la capacidad inhibitoria de aislados de Lactobacillus contra el crecimiento in vitro de Salmonella entérica y determinar metabolitos relacionados con la inhibición.MATERIALES Y MÉTODOS:Porcentaje de Reducción del crecimiento de Salmonella en presencia de sobrenadantes libres de células (SLC) del producto fermentado con lactobacilos (%RC), co-incubando la bacteria y los SLC por 24 h (horas) y determinando Densidad óptica (DO) a 600 nm. El %RC se calculó utilizando la siguiente fórmula:%RC=[(DOc+ - DOtto)/DOc+]x100,donde: DOc+:DOcontrol (+), DOtto:DO tratamiento.Inhibición de la capacidad de asociación e invasión de Salmonella a células Caco-2/TC-7, mediante pre-incubación de la monocapa con bacterias lácticas, empleando gentamicina para diferenciar bacterias asociadas (adh) de las internalizadas (inv), calculando el %Adh/Inv relativo de la siguiente forma: % de Adhesión/Invasión relativo de Salmonella= [Recuento aislado (adh/inv)/Recuento control(adh/inv)]x100. Muerte bacteriana de Salmonella en co-incubación a 37°C con: cultivo completo (producto fermentado y lactobacilos), SLC y lactobacilos solos. Se hicieron recuentos en placa a las 0, 2, 4, 6 y 24 h de incubación.Determinación de ácidos orgánicos mediante (HPLC) en los SLC. Se identificó presencia de ácido láctico y acético, empleando soluciones estándar de ambos ácidos a diferentes concentraciones. Los datos se procesaron con Microsoft Excel y Peak Fit (versión 4.12). RESULTADOS: Todos los SLC en concentración directa tuvieron efecto bactericida frente a Salmonella y para algunos aislados, hasta una dilución ¼. Los porcentajes de adhesión e invasión relativos de Salmonella en células Caco-2/TC-7 variaron según la cepa, entre el 79-93% y el 53%-87% para adhesión e invasión, respectivamente. Se obtuvo inhibición total del crecimiento de la cepa patógena entre 0 y 2 h de co-incubación en presencia de los cultivos completos (microorganismo+SLC), y entre las 2-4 h y 4- 6 h para el caso del SLC y del pellet microbiano, respectivamente. Las bacterias lácticas produjeron ácido láctico no disociado entre 85-160mM y ácido acético entre 100-170 mM en los SLC. DISCUSIÓN Y CONCLUSIÓN: Podemos concluir que tanto las cepas como sus metabolitos poseen un efecto inhibitorio in vitro frente a Salmonella.