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El anticuerpo monoclonal (mAb) 1B4E9 es específico contra gliadinas y actualmente es deutilidad en la certificación de alimentos para celìacos. El mAb 1B4E9 no había sido clonado anivel molecular, sólo estaba disponible el hibridoma productor (ref. Chirdo 1998). Nuestro grupoha clonado las cadenas pesadas y livianas de este mAb y ha realizado el modelado de la estructuratridimensional. La identificación de los epitopes de las gliadinas y de los residuos del anticuerpomás importantes en el reconocimiento del antígeno va a permitir proponer modificaciones en elmAb que mejoren los métodos de certificación. Para completar estos estudios es necesario obteneren niveles adecuados la expresión del anticuerpo 1B4E9.El objetivo del presente trabajo fue aumentar los niveles de expresión en E. coli del anticuerpomonoclonal anti-gliadina proveniente del hibridoma 1B4E9 mediante quimerización del Fab y elclonado como scFv (single chain) en los vectores pComb3X y pMalPSS.La quimerización es una de las estrategias más comunes para aumentar los niveles de expresión enE. coli de Fabs fusionando los dominios variables con dominios constantes de anticuerpos conbuenos niveles de expresión. La quimerización del Fab anti-gliadina se realizo utilizando OE-PCR(Overlapping Extension PCR) para fusionar los dominios variables de ambas cadenas con losrespectivos dominios constantes humanos. El producto final fue clonado en los vectores pComb3Xy pMalPSS para su expresión en superficie de fagos M13 y expresión periplásmica en E. coli,respectivamente. Se construyó además la versión simple cadena (scFv) del anticuerpo anti-gliadina1B4E9 que fue también clonado en los vectores pComb3X y pMalPSS. El vector pMalPSS proveeuna fusión N-terminal de MBP (Maltose Binding Protein), que aumenta los niveles de expresiónde proteína soluble.Los resultados de los inmunoensayos revelo que la mejor expresión se obtuvo con la construcciónscFv en el pMalPSS.

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