Obtención de callos y suspensiones celulares recombinantes de Nicotiana tabacum

ALVAREZ MARÍA ALEJANDRA; PETRUCCELLI, SILVANA; PITTA ALVAREZ, SANDRA; MARCONI, PATRICIA; MEROÑO, TOMAS; PARMA, YANIL; LOPEZ, JULIETA

Valparaíso

Congreso; VI Encuentro Latinoamericano y del Caribe de Biotecnología Agropecuaria. REDBIO-Chile 2007,; 2007

REDBIO-Chile

Obtención de callos y suspensiones celulares recombinantesDe nicotiana tabacum.María Alejandra AlvarezCONICET, Argentinamalvarez@fundacioncassara.org.arPetruccelli, Silvana, CIDCA, Fac. Cs. Exactas, UNLP, Argentina; Pitta-Alvarez, Sandra;Marconi, Patricia; Meroño, Tomás; Parma,Yanil; López, Julieta, Fund. P. Cassará, Centro deCiencia y Tecnología Dr C. Milstein, ArgentinaEl presente trabajo tiene como objetivo expresar el anticuerpo 14D9 en callos y suspensionescelulares (SC) de N. tabacum. Para ello fueron utilizadas plantas recombinates cultivadas invitro que portan el transgen para el anticuerpo (Ac) 14D9: Ac2 y AcK6 (ésta con el agregadode la señal KDEL) (Petruccelli et al. 2006; Martínez et al, 2005). A partir de plántulas de estaslíneas fue inducido el crecimiento de callos utilizando medio MS con el agregado de 2-4D (0,2y 1 mg/L) o ANA: KIN (2:0.2 mg/L). Cada 4 semanas los callos fueron repicados al mismomedio y se tomaron muestras de biomasa y producción e integridad del Ac por ELISA yWestern Blot. A partir de callos friables obtenidos de cada una de las líneas recombinantesse iniciaron los cultivos de SC. Para ello fue utilizado medio MS líquido suplementado conANA:KIN (2:0.2 mg/L). Los subcultivos al mismo medio fueron realizados cada 15 días. Seobtuvieron numerosas líneas de callos y SC. La producción del Ac en biomasa fue mayor enla línea AcK6 (2.695 % PTS) respecto de la línea Ac2 (0.833 % PTS). Esto permite calcular lamáxima producción de Ac: AcK6 (7.05 µg.mg-1) y Ac2 (2.12 µg.mg-1). La expresión de 14D9no tuvo efecto sobre el crecimiento celular. En el medio de cultivo no se detectó la presenciade Ac para ninguna de las líneas en estudio. La cinética de crecimiento reveló que la líneaAc2 acumula anticuerpo hasta el día 15 de iniciado el subcultivo y luego decae abruptamente.En la línea AcK6 el pico de acumulación alcanza el día 25 coincidiendo con el período deenvejecimiento del cultivo. Las diferencias entre ambas líneas pueden ser atribuidas a que elanticuerpo es retenido en el RE (línea AcK6) lo que le conferiría un ambiente más protegido ala degradación.Fueron realizados ensayos de producción de anticuerpo con el agregado de aditivos (PVP,gelatina y DMSO) al medio de cultivo. Tanto PVP como gelatina tuvieron un efectoestabilizante sobre el anticuerpo. Mientras que agregado de DMSO tuvo un efectopermeabilizante y asociado a un efecto tóxico.Palabras claves: Anticuerpos recombinantes, molecular farming.