INVESTIGADORES
PETRUCCELLI Silvana
congresos y reuniones científicas
Título:
Expresión de un anticuerpo monoclonal en plantas de tabaco y estudio de su glicosilación e immunogenecidad
Autor/es:
LAREU, F.,; CIRCOSTA, A.; PETRUCCELLI, SILVANA*,
Lugar:
Buenos Aires
Reunión:
Congreso; XI Congreso Argentino de Farmacia y Bioquímica Industrial. JorFyBI 2007; 2007
Institución organizadora:
Sociedad Argentino de Farmacia y Bioquímica Industrial.
Resumen:
Expresión de un anticuerpo monoclonal en plantas de tabaco y estudio de su glicosilación e  immunogenicidad. Lareu, Fabricio;  Circosta, Ariana; Petruccelli, Silvana Centro de Investigación y Desarrollo en Criotecnología de Alimentos. CIDCA-UNLP-CONICET. Calle 47 y 116. La Plata. Bs. As. Tel/Fax: 0221-4249287. E-mail silvana@biol.unlp.edu.ar Introducción. Los anticuerpos monoclonales (mAb) se están convirtiendo en el grupo más importante de proteínas para la industria farmacéutica estimándose un mercado de 30 billones US$ en el 2010. A diferencia de otras proteínas farmacéuticas poseen una actividad específica muy baja, lo que determina que se deba recurrir métodos de alta capacidad de producción. Aunque actualmente son producidos en células CHOS, los costos de instalación y producción de estas  de plantas son muy elevados. Las plantas transgénicas son un sistema alternativo por  su bajo costo, seguridad, fácil scaling up, capacidad de tolerar proteínas tóxicas para otros sistemas, etc.; aunque poseen la desventaja de que los niveles de acumulación son bajos. Una estrategia común para resolver este problema es retener el anticuerpo producido en el retículo endoplásmico (RE), sin embargo se conoce escasamente el efecto que esta retención produce en las propiedades del mAb.  El objetivo de este trabajo fue analizar el efecto  que tiene el empleo de una señal de retención/recuperación en el RE (KDEL) en las propiedades de un mAb producido en hojas y semillas.    Materiales y Métodos: los mAb fueron purificados a partir de hojas y semillas de plantas transgénicas que producían un anticuerpo secretorio (sec-Ab) y fusionado a una secuencia de retención en el RE (Ab-KDEL). Los mAbs purificados  fueron analizados por Western Blot  empleando anticuerpos específicos de glicanos y  MALDI-TOF. Se analizó la capacidad de estos mAb de reconocer el antígeno, de interactuar con proteína A e inmunogenicidad en  ratones BALB/C. Resultados: los estudios de glicosilación por Western Blot y MALDI-TOF mostraron que sec-Ab purificado de hojas (sec-AbL) poseía glicanos complejos conteniendo β1,2-xilosa, α1,3-fucosa y epitopes Lewisa. En cambio, Ab-KDELL carecía de glicanos complejos siendo las formas predominantes Man 7 y Man 8, consistentes con una  recuperación eficiente a partir del cis-Golgi (Figura 1). En cambio, ambos anticuerpos purificados de semilla muestran glicanos complejos (sec-AbS y Ab-KDELS). Sec-AbL y Ab-KDELL interactúan  de igual manera con el hapteno,  lo que muestra una estructura Fab normal. En cambio, Ab-KDELL  muestra una interacción con proteína A más fuerte que sec-AbL, lo que indica una estructura Fc alterada. Ab-KDELL  es inmunogénico para ratones BALB/C, mientras sec-AbL no lo es (figura 2). Estos animales muestran una respuesta inmune reducida contra glicanos por los que la reactividad se puede atribuir a una estructura Fc alterada. Conclusiones: aunque el empleo de una secuencia de retención en el RE produce un incremento en los niveles de acumulación, la presencia de glicanos ricos en manosa,  junto con la estructura del Fc e inmunogenicidad, indican  una limitada  utilidad de los Ab-KDELL, que no se observa en Ab-KDELS, cuyos niveles de acumulación son elevados y no son retenidos en el RE sino transportados a vacuolas.